红外与近红外分光法及在蛋白分子的分析中的应用.pdf

摘要 红外和近红外分光法及其在蛋白分子研究中的应用 摘要 红外和近红外分光法的优点在于，能够直观地获取分子振动的 光谱信息，并且对任何样品在任何状态下都能检测，它们作为无损、 快速的分析方法已经被广泛地应用于生物、医学等领域。为了更好 地利用红外和近红外光谱研究蛋白分子的结构和特性，人们不断地 提m新的实验手段和光谱分析方法，但是仍然存在一些难题没有很 好地解决，特别是溶液中蛋白分子的二级结构、水合作用及其动力 学过程还有待进一步阐明。此外，虽然分子振动理论早已完善，但 是随着计算机技术的发展，利用分子振动理论与计算机辅助相结合 解析分子振动状态的研究工作也有必要进一步完善。 本论文利用红外和近红外光与分子相互作用的理论，通过对加 热导致的溶液中蛋白分子的变性过程的分析，对溶液中蛋白分子的 二二级结构、水合作用及其热动力学特性进行了详细的研究。在研究 中，采用了计算机辅助分子振动分析、光谱解析和光谱实验相结合 的手段。首先，利用分子振动理论与计算机辅助相结合，系统地研 究了分子的振动状态并总结了其规律；其次，在实验上通过对溶液 中蛋白分子的热动力学红外和近红外光谱的检测和解析，研究了蛋 白分子的二级结构、水合作用及其热动力学过程；再次，在参与分 光光度计项目研究的基础上，对红外和近红外光谱实验方法和实验 装置进行了研究。 l 在本论文中，所完成的研究工作和取得的研究结果概要如F： (1)分予振动理论方面：①从经典和量子力学理论的角度对 分子振动理论进行了阐述。②利用分子振动理论与计算机辅助相结 合研究了不同结构分子的振动状态，特别模拟了分子的内坐标力常 数对分子振动基频的影响，为分子光谱实验和光谱解析提供了指导。 (2)在红外分光法对重水溶液中BSA的研究中，主要利用酰 胺I谱带解析了蛋白分子在重水溶液中的二级结构及其热动力学过 程，不同的分析方法所获得的结果为：①二阶导数光谱和曲线拟合 用于分离来源于不同二级结构的谱带。在26oC时，BSA的二二级结 构含有62．54％的a一螺旋、29．11％的口一链、7．76％的口一转角以及 不含∥一片层；在90℃时，含有18．20％的a一螵旋、3i．53％的疗一 链、25．11％的卢一转角、19．70％的箩一片层和5．46％的无规卷曲。结 果表明，在升温过程中，二级结构的变化表现为：麒一螺旋的减少不 仅仅伴随着∥一片层的形成，而且还伴随着口一转角的增加和无规卷 factor 曲的形成。②相关性分析和渐进因子分析(Evolving analyais， EFA)用于解析重水溶液中蛋白分子二级结构变化的热动力学特性。 它们的结果均表明，在升温过程中，BSA的显著结构变化发生在温 度区间70-82 oC。此外，三因子渐进因子分析的结果,N)ji，加热导 致的重水溶液中BSA的结构变化发生在两个温度区域——56．70oC 和70-82℃，其中56—700C的结构变化比较徽小，仅表现为∥一片层 的形成，而70-82。C附近的结构变化表现为声一片层和声一转角的增 加以及无规卷曲的形成。⑨二维相关光谱用于解析不同二二级结构之 摘要 问在加热过程中的相关性变化。同步相关光谱的结果显示，在加热 过程中0c一螺旋与∥一片层和卢一转角之间有很强的协同变化，这表 明d一螺旋的减少导致了卢一片层和声一转角的增加。异步相关光谱 的结果显示，在加热过程中，最早发生变化的是反一螺旋结构，口一 片层结构的变化要早于芦一转角、卢一链、无规卷曲的变化。 cmJ和4900．4200cm’1两个光谱区域分别用于研究BSA在溶液中的 水合作用和二级结构，所获得的结果为：①水溶液中BSA的温度 相关差光谱在光谱区问7200．6600