离子束介导源全dna转化拟南芥菜的若干问题研究.pdfVIP

郑州大学博士论文 摘要 离子束介导外源全DNA转化拟南芥菜的若干问题研究 摘要 在离子束介导外源全DNA转化中，外源全DNA包含有供体的所有遗传信 息，这些外源片段对受体的影响是多方面的，因此转化效果无法用统一的转化率 来衡量，这就给最佳转化条件(主要是转化剂量)的选择带来了很大的困难。我 们从另外一个角度出发，在离子注入剂量-拟南芥菜存活曲线的基础上，选择不 同的离子剂量介导薄荷全DNA转化拟南芥菜，根据各个转化群体在遗传和生理 上的不同变化，选择1．5×1017ions／cm2作为我们以后转化工作的转化剂量。 用GC—MS分析了离子束介导薄荷全DNA转化的拟南芥菜个体的挥发油成 分，在250个转化当代植株中有两株被测出含有薄荷醇，在这两株的267个T2 代植株中仍有1株被测出含有薄荷醇，该实验为离子束介导外源全DNA转化实 现物种问多基因复杂性状的转移提供了明确的证据。实验结果表明，通过离子束 介导外源全DNA转化可以把供体中控制某一复杂性状的多个基因转化到受体细 胞，并协调表达。从遗传学的角度深入分析了离子束介导外源全DNA转化性状 遗传呈现新特点的内在机制。 用离子束介导与拟南芥菜亲缘关系从近到远～系列的外源供体的全DNA转 化拟南芥菜，在转化当代营养生长期，各转化群体的表型变异情况没有明显的差 别。但在生殖生长阶段，低育性株率的变化随着亲缘关系的从近到远呈现出一种 先升高再降低的变化趋势。对这种现象的分析表明，外源全DNA片段(主要是 非编码序列)对转化受体除了插入诱变的作用外，还可能存在一种新的诱变机制。 转化当代和后代产生了许多变异个体，变异性状的遗传与转化当代外源DNA供 体的亲缘关系有一定的相关性。在离子束介导红甜菜转化后代中筛选到两个稳定 变异株系TC243．1和TC243．2，经与拟南芥菜突变体库比较，确认为新的变异类 型。 利用分子生物学研究方法对转化当代和后代个体进行分子检测，采用RAPD 分析法验证了转化当代的表型变异主要来自外源DNA片段的转化，而非离子注 入本身的诱变效应。T．6和其T2代植株的RAPD．PCR扩增结果中均存在缺失条 带S168郴50，表明该缺失条带对应的变异是可以遗传的，该变异发生在ABC． 郑州大学博士论文 摘要 Transporter基因exon 组序列库的比对结果表明，该条带不是拟南芥菜基因组本身的DNA序列， Southern杂交结果表明该条带来自转化供体甘蓝基因组，找到了外源全DNA转 化受体的分子证据，进一步分析表明该外源片段在转化过程中发生了结构变化和 的变异不是来自外源花粉的污染，同时发现了特异条带8270-1600对应的变异在 T2一T5代能连续稳定遗传。 关键词：离子柬介导转化；外源全DNA；拟南芥菜；性状转移；RAPD分析 II 郑州大学博士论文 Abstract ofIonBeam-Mediated OilSomeProblems Exogenous Study T．otalDNATransformationintoA．thaliana Abstract ofaH In DNA totalDNAconsisted ionbeam—mediatedtotal transformation．the was of informationin had on there