雌激素硫酸转移酶SULT1E1功能调控的研究.pdf

雌激素硫酸转移酶SULTlEl的功能及调控研究 中文摘要 雌激素作为类固醇激素，主要通过和细胞核(膜)上的雌激素受体结合，在 人体的靶器官和组织中发挥重要的调控作用，可影响分泌、新陈代谢以及生殖和 发育等正常的生理功能。 机体内雌激素的水平由合成和代谢途径来达到平衡。雌激素的合成由芳香 的代谢则主要通过硫酸化途径完成，可将雌激素转化为硫酸化的雌激素。其中， 雌激素硫酸转移酶SULTlEl是雌激素硫酸化反应的关键酶。目前，关于雌激素 硫酸转移酶SULTlEl的研究多集中在它和激素依赖性肿瘤之间的关系，具体调 节机制尚不十分清楚；另外，SULTlEl在雌激素的另一个靶组织一血管内皮 中的功能尚未见研究报道。因此，本课题分三个部分，分别研究雌激素硫酸转移 酶SULTlEl在激素依赖性肿瘤以及血管内皮细胞中的功能及调控： 第一部分：雌激素可通过调节细胞增殖和凋亡影响激素依赖性肿瘤包括乳腺 癌和子宫内膜癌的发生发展。硫酸化反应是雌激素代谢的主要途径，雌激素硫酸 反应底物硫酸基团。首先，通过组织芯片染色以及临床病理标本分析，我们发现 雌激素硫酸转移酶SULTlEI和PAPSS在肿瘤及其癌旁(正常)组织中的表达存 在差异性，SULTlEl和PAPSS在肿瘤组织的表达较正常或者癌旁组织高。体内 实验发现注射腺病毒SULTlEl可以抑制裸鼠移植瘤的生长。在MCF一7细胞体处 PAPSSl可以抑制雌激素引起的细胞增殖；流式细胞检测表明：雌激素可以保护 速细胞的凋亡。为进一步阐明其发生机制，我们检测了增殖和凋亡相关的基因／ D1以及抗凋亡分子bcl．2的表达，而上调促凋亡分子bax的 细胞周期蛋白eyclin 水平。说明SULTlEl和PAPSSl通过调节细胞增殖和凋亡相关分子的水平抑制 肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。 第二部分：雌激素在心血管系统发挥重要的作用，可保护血管内皮细胞的功 能。雌激素可被硫酸转移酶SULTlEl催化生成硫酸化雌激素。但迄今为止，尚 未见有关SULTlEl在内皮细胞中的功能的研究报道。我们推测，SULTlEl可能 影响内皮细胞的功能。我们检测了SULTlEl在脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表 达，结果显示：SULTlEl在HUVEC中表达较丰富且在前几代细胞中持续表达。 可以下调SULTlEl的表达，减弱酶的活性以及降低雌激素硫酸化水平。体内酶 活性检测表明：SULTlEl可转化80nM的雌激素，而干扰SULTlEl只能转化 40 nM的雌激素。通过实时PCR基因筛选，我们发现干扰SULTlEl后可调节炎 症因子的释放、胆固醇水平以及细胞迁移，并影响其相关基因和蛋白的表达。而 我们进一步探讨了雌激素是否会影响SULTlEl的作用。和不加雌激素相比，加 入80 nM的雌激素可以逆转SULTlEl对炎症因子、脂质代谢和细胞迁移相关分 82780处 子的调节作用，而雌激素受体ERD干扰或者雌激素受体ER拮抗剂ICll 理后，雌激素的调节作用减弱。为解释这一现象，我们加入雌激素E2和硫酸化 雌激素E2S检测它们对上述基因的调节。E2S可以上调PPARl,、IL．4和脂质代谢 相关基因的表达，E2作用刚好相反。这说明，在外源性雌激素存在的情况下， 对照组只有E2S的调节作用，而干扰SULTlEl组有E2和E2S的双重调节。该结 的炎症因子释放、胆固醇代谢和细胞迁移能力。 第三部分t基于雌激素硫酸转移酶SULTlEl在雌激素功能中的影响的重要 性，针对SULTlEl的调控显得尤为重要。目前，关于SULTlEl的调节方面的研 究不多。有文献报道，IGF．1可以增加乳腺癌细胞中雌激素硫酸酯酶STS的活性； 另外，PPARa对硫酸转移酶的调节尚存在争议。因此，我们推测IGF．1和PPARa 活性使硫酸化雌激素的生成增加；WYl4643减弱SULTlEl酶的活性而减少了硫 酸化雌激素的生成。我们构建含S切ⅡlEl启动子区的荧光素酶报告基因载体。 通过荧光素酶活性检测发现，IGF．1使SULTlEl的荧光素酶活性增加；而加入 PPARa激动剂WYl4643后，SULTlEl的荧光素酶活性下降。 综上所述，我们得出以下结论：雌激素硫酸转移酶SULTlEl和PAPSS可通 过调节细胞增殖和凋亡来减慢裸鼠移植瘤的生长并且抑制雌激素诱导的肿瘤细 胞促增殖和抗凋亡作用；另外，S