HIV-1新发%2f急性感染者体内nef基因遗传进化及Nef特异性细胞毒性T细胞应答的研究.pdf

中文论著摘要· —1￡^—L 日{J吾 HIV-1原发感染者体内nef基因遗传进化及Nef特异 性细胞毒性T细胞应答的研究 目 的 人免疫缺陷病毒(Human 病毒，是引起获得性免疫缺陷综合征(Acquiredimmunodeficiency syndrome，AIDS)的病原体。 HIV被发现后的20多年以来，人们一直致力予疫笛研发，目前虽然己有70多种疫苗获准 ● 进入临床实验硼，但仍未取得根本性突破，主要原因在于目前人们对于病毒与宿主免疫系统 相互作闱的过程缺乏完整认识，朱能全面揭示HIV-I特异性免疫应答与病毒遗传进化的内在 关系。许多资料表明，针对HIV的早期调控蛋向Nef的免疫应答，在抗HIV-I的感染中可 能有重要的保护作用。Nef蛋白已经正在成为艾滋病疫苗研究的重要靶点乜3．41。 体内病毒复制和AIDS的发病机制起到重要作用‘洲。细胞毒性T淋巴细胞 T (cytotoxic 用，受到多数研究者的认同，对新发／急性感染者体内病毒特异性CTL应答与病 毒进化规律的研究能揭示感染者感染早期CTL应答对病毒的选择作用及其差异， 对于探索保护性免疫应答有重要启示。 在宿主免疫压力下，病毒一方面通过Nef蛋白降低感染细胞表面MHC—l类分 子表达，来减弱免疫细胞的识别和杀伤功能n叼’一方面通过Nef基因快速变异来 逃避CTL应答。HIV-Inef基因是病毒毒性的主要决定因素之一，其变异程度很 大程度上受到其功能的限制。nef基因在所有灵长类慢病毒如HIv_l、HIV-2和 SIV中相对保守口¨，nef缺失或显著的不J下常是很少见的n副。 目前，已有的研究大多对HIV—l长期不进展者的Nef蛋白进行了研究，对新 发／急性感染者的研究很少，且研究结果存在争议。目前公认病毒调定点 nef (setpoint点)决定感染者的预后，而CTL应答义是影响setpoint的重要冈素， 区是CTL应答的重要靶位，对不同调定点新发／急性感染者感染早期nef进化以 及与CTL应答的关系的研究，有可能为HIV疫苗靶位的选择提供重要的线索。， 方法 l、研究对象 本试验选取8例确认为新发／急性感染者为研究对象，其中在6个月内HIV抗体开始交 同l性者2例，HIV抗体阴性但HIVRNA la{性者6例；最早观察点(确认HIV感染后第 一次采集血样的时间，以下叫做观察点1)实验室分期(Fi_ebig，E．w)Ⅳ划6例，Ⅵ期 病毒setpoint组(4loglOcopi髓／mL)和低病毒setpoint．组(4loglOeopiestmL)‘‘引。所有研究对 象均签署伦理·知情同意：15。 ’ 2、CD4+T淋巴细胞测定 CD4／CD8／CD3 209l MMLTISET 温避光15min，加入免洗溶血素450|11，室温避光15min，用FACS 软件检测并进行自动分析、计算CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞绝对值及相应比 值等。 3、病毒载量测定 commercial Monitor1．5 kit在COBAS 测定病毒载量。检测范围为400-750，000copies／ml。 · ’4、病毒核酸提取、RT—PCR Kit 以抗凝1401xl血浆提取病毒基因组RNA，