RNAi沉默人唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞bcl-2基因研究.pdf

目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………3 研究论文 的研究 前言………………………………………………………………………6日!J舌……………………………………………………………………… 材料与方法………………………………………………………………7 结果……………………………………………………………………14 附图……………………………………………………………………15 附表……………………………．．……………………………………．22 讨论……………………………………………………………………23 结论……………………………………………………………．．……．27 参考文献………………………………………………………………28 综述bcl．2基因与唾液腺肿瘤……………………………………………3l 致谢…………………………………’………………………………………．39 个人简历……………………………………………………………………．40 中文摘要 RNAi沉默人唾液腺腺样囊性癌SACC。83细胞 bcl．2基因的研究 摘 要 目的： adenoid 唾液腺腺样囊性癌(salivarycystic 腺最为常见的恶性肿瘤之一，发生于唾液腺的任何部位。肿瘤恶性程度高， 容易沿神经、血管浸润性生长，术后常复发，也可发生肺、骨、脑和肝等 远处转移。由于肿瘤的恶性生物学行为，直接威胁患者生命，目前术后尚 无有效的治疗方法。 cell B淋巴细胞瘤／白血病．2(B 种抑制细胞凋亡的癌基因，在众多凋亡相关基因中bcl．2是目前最受关注的 基因之一。定位于人的滤泡性淋巴瘤和正常B淋巴细胞染色体18号21区， 其中bcl．2a是抑制凋亡作用发挥的主要蛋白，为线粒体膜的整合蛋白。它 最先是在人类滤泡型淋巴瘤中发现，被认为是人类滤泡型淋巴瘤的细胞遗 传学标志，但后来研究发现，它在人类肿瘤中有广泛意义。在许多肿瘤组 织中，bcl．2基因的表达水平通常会发生改变，它与肿瘤的发生、发展及预 后有关。 strand 研究技术，是由外源或内源的双链RNA(double 达。RNAi具有高特异性、高效性、高稳定性、可遗传性、可扩散性和浓 度时间依赖性等特点。利用RNAi技术，在RNA水平特异性抑制特定基因 的表达，使特定基因获得功能性丧失，从而成为研究基因功能的良好工具。 本实验采用RNA干扰(RN削)技术特异性沉默人唾液腺腺样囊性癌 凋亡情况。 方法： 1重组腺病毒的构建与鉴定：武汉淅玛生物技术公司受本实验室委 中文摘要 托，设计并构建重组腺病毒包裹的shRNA-bcl一2，使用双酶切进行鉴定。 2细胞培养：采用含15％胎牛血清的RPMI1640培养液培养人唾液腺 腺样囊性癌细胞株SACC．83。 3细胞转染及滴度测定：将腺病毒介导的shRNA真核表达载体 未转染shRNA真核载体的SACC．83细胞(未转染组)作为空白对照。 4bcl．2基因沉默效率的检测：采用Real．TimePCR技术，从mRNA水 平检测基因沉默(RN础)后SACC．83细胞中bcl．2基因的表达。 5细胞凋亡检测：利用流式细胞术分别检测SACC-bcl．2细胞、 SACC．HK细胞、SACC．83细胞凋亡情况。 结果： 94．10％。 3基因转染48h后，Real．TimePCR时实定量检测发现，腺病毒介导 90．19％。 1 和1．48士0．23，沉