金属螯合亲色谱填料的制备及其在六聚组氨酸融合蛋白分离中的应用.pdfVIP

金属螯合亲和色谱填料的制备及其在六聚组氨酸 融合蛋白分离中的应用 孙永亮 摘要近年来，随着基因工程技术的发展，分离纯化基因重组蛋白的下游技 术越来越显示出其重要性。从成分复杂的表达体系中分离纯化目的蛋白是一项艰 巨而繁重的任务。目前基于分子的尺寸、形状、电荷、分子量、吸附等性质的差 异进行蛋白质分离的方法也已在蛋白质纯化中得到不同程度的应用，而金属螯合 亲和层析法(Metal ChelateAffinity Metalion 和层析法Immobilized Affinity 选择性好、操作简单丽成为一种重要的蛋白质分离方法。研究表明，影响金属螯 合亲和色谱分离效果的因素很多，如溶液的pH值、盐浓度、洗脱方式等，但决定 色谱填料分离效果的主要因素在于填料的基质、配基及螯合金属离子种类。琼脂 糖(Agarose)具有良好的亲水性和稳定性，与可溶性蛋白的非特异性反应小。作 为填料基质既可在非变性条件下使用，又可在变性条件(如6mol／L笳酸胍或8 molFL尿素)下使用。本实验用琼脂糖作为基质，选