高效液相色在线电生试剂化学发光检测技术的研究.pdf

高效液相色谱在线电生试剂化学发光检测技术的研究 张琰图 Performance 摘要高效液相色谱(High Liquid 是一种具有高效、快速及应用广泛的现代分离技术。检测器作为HPLC系统的重 要组成部分，充当着“眼睛”的角色。近年来。在众多的HPLC检测器当中，化学 发光检测器(cLD)由于其具有灵敏度高，线形范围宽及仪器设备简单等优点，被 越来越多地应用于各种复杂样品中pg或fg级含量化合物的检测，成为一种理想 的分离分析方法，也是当今分析科学领域内研究非常活跃的热点之一． with 电生试剂化学发光(Chemiluminescenceelectrogeneratedreagents)法是利 用电化学手段，使不稳定氧化剂在电极上在线产生后与被测物质或发光试剂反应 产生化学发光，基于直接氧化还原反应、增敏反应或能量转移过程而建立起的一 种新型化学发光分析方法，已用于流动注射化学发光分析。但如何提高该法的选 择性，使其在实际应用中真正得到更好和更广泛的应用，仍然是存在的一个问题。 氧化活性；在完成电解池设计、柱后接口、优化色谱分离和化学发光检测器条件 的基础上，提出了一系列灵敏度高、选择性好的HPLC-cL检测新方法，为高效液 相色谱增添了一种新的具有高灵敏度的检测器：并将这一新的电生试剂化学发光 检测器应用于实际样品如食品中违禁添加剂(苏丹红)、药物残留(糖皮质激素、B2 激动剂)及人体血液和尿液某些药物浓度的检测中。现就HPLC．CL脸测技术的研究 进展(第1章)和具体研究工作(第2．5章)简述如下： 第l章主要就HPLC．CL检测技术的基本原理、系统构建、典型化学发光反 锰酸钾、铁氰化钾、四价铈化学发光体系等)及近10年来在生命科学、药学、临 床医学、环境及食品等领域的应用和进展情况进行了评述。对这一检测技术在实 际应用中存在的问题进行了分析，对其发展方向进行了展望。 结合及其应用进行了研究，包括： (1)高效液相色谱在线电生BrO’．1uminol化学发光法检测辣椒中的苏月·红 研究发现，苏丹红(I—IV)能够强烈增敏通过恒电流电解方法在线电生BrO。 时检测4种苏丹红(I-IV)的新方法。色谱分离以Nucleosil i．d．，5ttm，poresize，100 mL 动相，柱温35。C．，流速1．0rain一，同时分离检测四种苏丹红的总时间为25 min。系统研究并优化了流动相、电生试剂化学发光检测的有关条件。该法检测 ∥gkg_1．苏丹红在实际样品中的平均加标回收率为94％～105％(添加水平为1．0， 1．5 mL-1的样品溶液连 mg／kg)。对含4种苏丹红浓度分别为O．01∥gmL1、0．8pg 续11次平行测定的相对标准偏差(R．S．D．)都小于3．0％，其同间精密度R．S．D．都小 于4．4％。该方法已成功应用于辣椒或辣椒酱制品中苏丹红含量的分析。 类化合物的研究 多西环素(DC)能够强烈增敏通过恒电流电解方法在线电生BrO。和鲁米诺产生 化学发光，提出了一种经高效液相色谱(HPLC)分离柱后同时检测4种四环素类 抗生素药物的新方法。以Nucleosil ram×4．6 RP—C18(250mm，i．d．，5 size， Ilm，pore 流速1．2mLrain～，柱温25。C，同时分离检测四种抗生素的总时间为11min。研 究并优化了流动相、电生试剂化学发光检测的条件。四种抗生素的检出限为 mLl的四种抗生素测定的相对标准偏差 0．002～O．008∥gmLl(3s)，对0．01∥g 为2．O％～3．6％∽=11)。该检测器已成功应用于牛奶中残留四环素类抗生素含量 的分析。 第3章就在线电生【cu(H106脚。化学发光检测技术与高效液相色谱结合在兽 药残留分析中的应用进行了研究，主要包括以下2个研究工作：