氨基葡萄糖阳离脂质体基因载体的合成和性能研究.pdfVIP

摘要 基因治疗的核心是设计一类高效、安全的基因载体。作为非病毒 载体的一类，阳离子脂质体可与核酸药物静电吸引形成复合物，它与 细胞膜的磷脂分子相互作用而附着在其表面，随着细胞膜的内陷，复 合物进入细胞并且释放核酸药物至细胞核。 本论文设计了两个系列氨基葡萄糖阳离子脂质体。一类以氨基葡 萄糖盐酸盐为原料，通过全乙酰化、脱1．D乙酰基、三氯乙酰亚胺酯 化、糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、4,6．O．异丙叉基保护、苄氧基 保护、脱异丙叉基、醚化、还原氨化和季铵盐化反应，合成不同疏水 1 1 di-C14．GluNAc．TMA、di-C6．GluNAc．TMA和di—C8．GluNAc．TMA； 另一类以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，通过全乙酰化、脱1．D-乙酰基、 三氯乙酰亚胺酯化、糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、还原氨化、叔 胺化和季铵盐化反应，合成不同疏水链长度和不同物理结构的一系列 GluNAc．DiC1 18Ⅳ队。 6Ⅳ队和GluNAc．DiC 通过ZetasizerNano ZS激光粒度仪测定了阳离子脂质体和脂质 体／DNA二元复合物的Zeta电势、粒径和PDI；凝胶阻滞实验检测了 阳离子脂质体缩合质粒DNA的能力。原子力显微镜对阳离子脂质体 及二元复合物的表面形貌进行了表征。激光粒度仪数据显示 di．C1 82．4 8．GluNAc．TMA平均粒径为1ni／1，大于其他阳离子脂质体 万方数据 纳米颗粒尺寸，分散系数(PDI)为O．43，粒径分布不够均一；其他 七种阳离子脂质体的粒径范围是80．150nln，脂质体对应复合物的粒 mV之间， 径范围在65—140nln；阳离子脂质体的Zeta电势在38．60 复合物的电势在O．5．28mV之间。这些数据表明脂质体及复合物的粒 径和Zeta电势适宜，符合体外转染实验的要求。凝胶电泳实验证明 阳离子脂质体有能力与DNA分子结合。当脂质体的量增多时，DNA 带的亮度减弱，当N／P为2时，两类阳离子脂质体与DNA分子结合 完全。原子力显微镜结果表明单一脂质体及脂质体／DNA复合物呈圆 球状、尺寸分布均一、表面光滑且直径略大于脂质体。核磁共振仪的 图谱结果证明阳离子脂质体的化学结构符合预期的设计。 以上述两类合成的氨基葡萄糖阳离子脂质体作为基因载体，检测 细胞培养后，通过观察绿色荧光蛋白的表达和细胞计数的方法评价阳 离子脂质体的转染效率。体外转染实验结果说明： 出C1 1 2．GluNAc．TMA、di．C14．GluNAc．TMA、di．C6．GluNAc．TMA、 1 1 讲．C8-GluNAc．TMA、GluNAc．DiC12MA和GluNAc．DiC8MA的转 可以与商用转染试剂Lip02000媲美。细胞毒性实验结果表明：除了 载体的潜力。 II 万方数据 将商用脂质体Lip02000作为阳性对照组实验，考察 1 1 GluNAc．DiC4MA和GluNAc．DiC 系的体外转染情况。结果发现，这两种阳离子脂质体在HepG2细胞 系中的转染效果与HEK293细胞系类似，而在HeLa细胞系中几乎没 有转染效果。 关键词：基因治疗，阳离子脂质体，氨基葡萄糖，基因转染效率。