以卟啉为探针毛管电泳分析蛋白质方法的研究.pdfVIP

摘 要 本论文从利用毛细管电泳定量微量蛋白质的角度出发，主要研究了利用水 溶性卟啉——meso．四(4．磺基苯)卟啉(TPPS4)作为光谱探针，在毛细管电泳上定 量微量蛋白质的方法，并探讨了两种卟啉作为蛋白质标记物应用于毛细管电泳 免疫分析的可能性。 本文研究了meso．四(4一磺基苯)卟啉染色测定蛋白质的复合反应，讨论了蛋 白质浓度与TPPS4溶液在435nm处光谱吸收值的线性关系。考察了反应温度及 时间、缓冲溶液酸度、TPPs4浓度对定量关系的影响，并探讨了非蛋白物质的 干扰和采用不同蛋白作标准工作曲线时各种蛋白质的响应。优化了光谱分析中 用TPPS4作为探针定量微量蛋白的条件。 f在光谱分析的基础上，研究了毛细管电泳技术定量微量蛋白质的方法。考 察了复合物形成后改变溶液酸度对复合物稳定性的影响，优化毛细管电泳分析 TPPS4的条件，并引入D．环糊精作为电泳缓冲添加剂进一步优化TPPS4的电泳 行为。最后以BSA作为标准蛋白质，建立标准曲线，对人血清中蛋白质总量进 行测定。本论文所建立的毛细管电泳定量分析蛋白质的方法，在未使用荧光检 测器或增加毛细管光程的情况下，比毛细管电泳蛋白质直接进样、紫外检测的 灵敏度提高了2个数量级。与毛细管电泳测定微量蛋白的常用