Pomifern对小鼠卵巢早衰的干预作用及机制研究.pdf

摘 要 feri Pomi n对小鼠卵巢早衰的干预作用及机制研究 硕士研究生 宋宇 研究生导师 王明臣教授 郑州大学基础医学院 河南郑州450001 摘要 ovarian 背景及目的 卵巢早衰(prematurefailure，POF)已成为严重危害 女性健康的疾病之一，而且发病年龄越来越呈现年轻化，发病率越来越高。虽 然随着科学技术的快速发展，在对卵巢早衰的诊断和治疗等方面取得了一些的 进展，但因其病因及发病机理较复杂，早期确诊艰难，并发症广泛，未找到理 想的治疗方法。因此，深入揭示卵巢早衰的病因及发病机制，寻找行之有效的 干预卵巢早衰发生、发展的线索和物质，具有重要的理论和实用意义。 目前对于PoF尚缺乏理想的干预防治手段。现在医学主要采用激素替代疗 法(HRT)、诱发排卵、免疫抑制治疗、自身或异体卵巢移植技术、卵子赠送及 移植等方法。近年来，异黄酮类化合物已被证实有较好的治疗卵巢早衰的效果。 Pomiferin(橙基异黄酮)是从桑橙中提取出来的一种异黄酮类化合物，具有植 ferin 物雌激素活性。它的分子式为C。。H：。06，分子量为420。已有研究证实Pomi 具有强抗氧化剂、弱雌激素、金属螯合剂、抗菌剂、调控细胞周期等作用。国 内外研究表明：Pomiferin具有植物雌激素作用，与内源性雌激素作用相似，而 且Pomiferin能与雌激素受体ER B结合。与一般的雌激素相比，能够减少乳腺 增生，子宫肌瘤，血栓等不良反应。从目前资料看，Pomiferin对卵巢早衰的治 疗作用研究还不明确，尤其是对干预卵巢早衰的机制研究尚比较缺乏。 现代医学普遍认为POF病因复杂，确切病因尚不明确，可能由众多因素引 起，如遗传学因素，免疫因素，放疗和病毒感染等。而原始卵泡储备减少，凋 亡加速，卵泡闭锁、卵泡成熟过程存在障碍也是其中之一。近年来，关于POF 发生的凋亡机制渐渐引起人广大学者的关注。细胞凋亡是细胞衰老、死亡的主 动过程，此过程受基因调控并按一定的程序进行。细胞凋亡为POF病因学提供 摘要 ． 了新的依据。在卵巢组织中，细胞凋亡调控了卵泡的繁殖和分化，可以说直接 加速了卵泡闭锁。Fas和Fas—L的的结合是成熟T细胞中活化、诱导凋亡的主要 途径。BCL一2是与Fas作用相反的分子，其能抑制Fas介导的细胞凋亡。 因此，基于以上分析推理，本实验拟探讨Pomiferin对小鼠卵巢早衰的干 预作用，并从细胞凋亡的角度深入探讨Pomiferin对卵巢早衰的作用机理。 方法 1．免疫性POF动物模型，分组与给药。小鼠SPF级BABL／C雌性小鼠作为实 体重)。 2．观察每组小鼠的卵巢形态学和动情周期的变化，用电子天平称量每组小 鼠用药后的体重、卵巢重量、胸腺重量，比较重量指数。 3．酶联免疫法检测小鼠外周血中FSH、E2水平。 。一 4．RT-PCR法测定卵巢组织Fas-L和Bcl-2mRNA表达。 5．免疫组化检测卵巢组织Fas-L和Bcl-2蛋白表达。 6．Western—blot检测卵巢组织Fas—L和Bcl-2蛋白表达。 结果 模型组： 1．动情周期：表现为动情周期紊乱，动情间期延长，阴道细胞涂片主要表 现为大量白细胞及少量上皮细胞； 2．卵巢形态：在卵巢间质，见到成熟卵泡少，而淋巴细胞和浆细胞浸润浸 较多； ． 3．体重、卵巢重量、胸腺重量指数均下降； 4．＆明显降低，FStt明显升高： 5．Fas-L明显升高，Bcl-2．明显降低。 Pomi ferin干预组： 1．动情周期：动情