TIPE2在尼丁抗炎通路中的作用机制研究.pdf

摘要 摘要 “胆碱能抗炎通路”是新近发现的神经．免疫调节通路，其激活可有效减 少多种促炎因子的释放，对全身和局部炎症均具有明显抑制作用。尼古丁，作 为一种胆碱能受体激动剂，其药理作用与乙酰胆碱ACh相似，可有效减轻炎症 反应。已有文献报道尼古丁能够降低促炎因子所引起的细胞因子TNF．q、IL．12、 lL。6的释放。但到目前为止，尼古丁抗炎通路的分子机制尚不清楚。TlPE2是 最近发现的一种免疫负调节分子，属于TNFAIP8家族，主要表达在胸腺、脾脏、 淋巴结以及小肠粘膜等免疫器官和淋巴组织中，对适应性免疫和固有免疫起到 负性调控作用。但TIPE2是否参与尼古丁所介导的抗炎过程，以及在其中可能 所起的作用及机制尚没有文献报道。本课题首先采用皮下注射的方法给予小鼠 持续的尼古丁刺激，以流式细胞术、ELISA检测小鼠脾细胞在抗原刺激下 n吓吨、IL4、IL．2及IL．12的表达情况；其次，体外诱导的巨噬细胞，尼古丁 刺激后，以流式细胞术检测LPS所致的细胞因子TNF．c【的释放；再次，以W．estem blot、激光共聚焦研究尼古丁对巨噬细胞、洲264．7细胞NF．KB通路的影响； Ⅱ7nAchR表达的调控，以及a7nAchR在尼古丁调控TIPE2表达中的作用；最 后，以Wbstemblot检测TIPE2过表达对NF—KB通路的影响，从而初步阐明尼 古丁通过NF．1①通路调控炎症反应的机制。结果发现：①体内持续尼古丁刺 的阳性细胞率分别由20％、14％、36％和75％降为13％、6％、15％和19％，细 胞培养上清中IL一12、IL-4的浓度分别由1625、425 p咖l降为139、153pg／ml； 在体外，尼古丁刺激降低LPS引起的巨噬细胞TNF．0【的表达，这种降低可以被 尼古丁受体阻断剂BTx逆转。②尼古丁处理可明显抑制LPS所致的巨噬细 胞及亿删264．7细胞IKB伐的磷酸化、降解以及p65、p50、p52的核转位。③在 蛋白水平上，尼古丁刺激可明显上调洲264．7细胞、小鼠巨噬细胞TIPE2的 nAChR 表达。④尼古丁刺激可上调巨噬细胞及小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞0【7 的表达；同时，尼古丁0【7nAchR特异性拮抗剂0【银环蛇毒素BTX或非特异性 Ⅱ 摘要 阻断剂筒箭毒碱Tc能够阻断尼古丁对TIPE2的上调作用，且BTX阻断效果更 核转位。 通过以上研究，我们发现尼古丁可以通过0【7nAchR上调TIPE2的表达， 进而负调控NF—lcB的活化，从而起到下调促炎凶子所引起的TNF．a等细胞凶子 的释放。本课题揭示了TIPE2在尼古丁抗炎通路中的作用及机制，为进一步探 讨神经系统与免疫系统之问的联系，为人们采取新的抗炎策略和干预手段提供 依据。 关键词：炎症；尼古丁；胆碱能抗炎通路；TIPE2；NF．KB IIl Abstract a discoVerednerve—immune “Choline唱icanti-inn锄matorypathway”isnewly actiVation reducethereleaseofa reglIlationpathway．Its c锄eff．ectiVely Variet)，of and inhibit andlocal p胁innammatoryc”okines significantlysystemic inn锄mation．Nicotineisan its acetylcholinereceptoragonist，andphamacological t0