产抑制革兰氏阴菌细菌素菌株的筛选鉴定及植物乳杆菌素LPC818的纯化.pdf

摘 要 植物乳杆菌产生的细菌素不仅种类多，其菌株可产生良好的保健功效，因此 成为研究的热点之一。为获得产细菌素的优良菌株，本文从多种植物源材料中筛 选出 4 株产细菌素的菌株，并对各菌株进行了分类鉴定。在此基础之上，对植物 乳杆菌 LPC818 产生的具广谱抑菌作用的细菌素 plantaricin LPC818 ，进行了较为 深入的研究。具体研究结果如下： 1. 从多种植物源材料中筛选到 4 株产细菌素菌株，经生理生化特性和 16S rRNA 基因序列的同源性分析鉴定，其中 3 株菌为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum ），1 株为亚利桑纳乳杆菌（Lactobacillus arizonensis ）； 2. plantaricin LPC818 对酸有一定的依赖性，在 pH3~5.5 时，具有抑菌活性； plantaricin LPC818 的热稳定性较好，经 100℃处理 30min 抑菌活力仍保持在 80% 以上；plantaricin LPC818 对蛋白酶 E 、蛋白酶 K 和脂肪酶敏感，对糜蛋白酶和 木瓜蛋白酶部分敏感，表明 plantaricin LPC818 为脂蛋白类物质； 3. plantaricin LPC818 的抑菌谱较广，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 有较强的抑菌作用。以鸡白痢沙门氏菌为指示菌，确定了 plantaricin LPC818 的 作用方式为杀菌； 4. 经 60%饱和度的硫酸铵沉淀、Sephadex G-25 凝胶层析和反向 HPLC 三步 纯化，plantaricin LPC818 的纯化倍数为7.87，得率为 0.8% ；通过蛋白质电泳及 ESI-MS 跟踪检测，推断出 plantaricin LPC818 的分子量为745.10Da 。 关键词：植物乳杆菌，植物乳杆菌素，筛选，特性，纯化 I Abstract Just because the variety of bacteriocins from Lactobacillus plantarum and beneficial effects, it became popular to do research on bacteriocins from L. plantarum . In the present paper, the isolation and identification of the strains producing bacteriocins were reported. Then, the primary characteristics of plantaricin LPC818, a novel bacteriocin with a broad inhibitory spectrum produced by Lactobacillus plantarum LPC818, were analyzed. These results were described as followes: 1. 4 strains producing bacteriocin were screened from a variety of fermented plant. These strains were identified by phenotypical and physiological tests and analysis of 16S rRNA gene sequence. The results demonstrated that one of them belonged to Lactobacillus arizonensis and the rest belonged to Lactob