壳寡糖聚合度与鼠肠道对壳寡糖吸收率的关系.pdfVIP

壳寡糖聚合度与小鼠肠道对壳寡糖吸收率的关系 硕士生姓名：王敏 指导教师：辛毅教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘要 0个氨基 葡萄糖以B-1，4糖苷键连接而成的低聚糖，通常由海洋动物所含丰富的甲壳素脱乙 酰化，再通过糖苷酶降解获得。壳寡糖是天然糖中唯一大量存在的碱性氨基聚糖， 其不但具有水溶性好、安全无毒、易被吸收等特点，且有多种生物活性：如增强 细胞和体液免疫，抑制肿瘤细胞生长增值，调控血糖血脂，增加肠道有益菌群数 量等。 壳寡糖的生物活性主要包括以下两个途径：首先，壳寡糖进入肠道后，抑制 大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌等肠道致病菌，增加双歧杆菌等益生菌群数量， 从而发挥肠道益生菌作用。其次，壳寡糖进入肠道后被吸收入血，到达相应靶器 官，发挥免疫作用、调节血糖以及抑制肿瘤生长增值。 目的：目前文献报道的关于壳寡糖功能的研究，多数是体外细胞培养或动物 实验来直接检测壳寡糖作用后的效能，然而，究竟壳寡糖进入消化道后吸收程度 如何，其中有多少剂量的壳寡糖被吸收入血到达靶器官发挥降糖，调节免疫，抗 癌的作用，多少剂量在肠道中发挥调节菌群作用从而间接调节免疫，抑制肿瘤细 胞生长的功效呢，目前文献还没有报道。本课题的目的是不仅追踪壳寡糖进入消 化道后的路径，且比较分子量大的壳寡糖和小分子量的壳寡糖在入血和入肠的比 例有无变化，是否小分子量壳寡糖被吸收入血量多而留在肠道内量少，大分子量 壳寡糖吸收入血量少而留在肠道内量多?本研究试图阐述壳寡糖作用后具体的主 要途径，为深入研究壳寡糖的作用机制提供实验依据。 方法：首先用蜗牛酶将壳聚糖水解成聚合度不同的壳寡糖，并通过聚丙烯酰 胺凝胶层析柱(Bio—Gel P4凝胶)将不同聚合度的壳寡糖分开，分别收集聚合度 为1．3，8-ll的壳寡糖，并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记，再通过聚丙烯酰胺凝 胶层析柱(Bio．Gel P．2／P．4)将游离的FITC除去，随后对两组禁食24小时的小鼠 分别用FITC标记的大分子量和小分子量的壳寡糖灌胃。1小时后取血清和小肠， 经分离水溶成分后，通过荧光分光光度计检测血清样品和肠溶物样品中荧光的强 度，进而确定壳寡糖是否被吸收入血，以及入血和直接从肠道排出的比例，从而 验证壳寡糖的入血比例是否和聚合度有关。最后将肠溶物或血清重新通过聚丙烯 酰胺凝胶层析柱(Bio．GelP-4凝胶)，确认FITC．COS并未在消化道内降解。 结果： (1)通过改变酶解时间，1蜗牛酶可以将壳聚糖水解成不同聚合度的壳 寡糖。利用Bio．GelP．4聚丙烯酰胺凝胶层析柱可以将不同聚合度的壳寡糖分离成 具有一定聚合度范围的壳寡糖。(2)FITC能够有效标记壳寡糖，并且利用Bio．Gel 的大、小分子量的壳寡糖给小鼠灌胃，从血清和肠溶物中均检测到荧光强度，两 者比值平均值分别为5．68：1和9．84：1。(4)肠溶物液和血液通过聚丙烯酰胺凝胶 层析柱后，在FITC-COS洗脱体积处检测到一个分子量大于FITC的荧光峰，证明 FITC．COS并未在消化道内降解。 结论：FITC．COS可以在肠道中顺利吸收且未被降解，FITC标记的大、小分 子量的壳寡糖入血入肠比例分别为：5．68：1和9．84：1，可见，壳寡糖在肠道的吸收 ‘ 比例随分子量的减小而增大。 关键词：壳寡糖小鼠吸收分布 2 DeterminationofIntestinal Ratesof Absorption withDifferentof Chito-oligosaccharideDegree erization Po