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大豆异黄酮的抑菌活性及其机制的研究
摘要
大豆异黄酮(soybean
主要分布在大豆种子的子叶和胚轴,现已经证明SI具有多种生物学活性,其中SI的抑
菌活性目前已有较多的报道,但对其抑菌机制研究较少。本文利用杯碟法和2,3,5一氯化
三苯基四氮唑(TTC)法,测定了SI的抑菌活性;通过扫描电镜与透射电镜、呼吸代谢
超螺旋解旋方法等研究了SI的抑菌机制。主要实验结果如下:
(一)大豆异黄酮的抑菌活性
1、大豆异黄酮对不同细菌的抑菌活性
SI对金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、
白色念珠茵、单增李氏菌、米曲霉和犁头霉均有明显的抑制作用,但对大肠杆菌和酵母
菌无抑制作用。
2、大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度
当SI终浓度为0.3mg/mL时,金黄色葡萄球菌的生长被完全抑制,因此确定该浓度
即为SI的最低抑菌浓度。
(二)大豆异黄酮的抑菌机制
1、大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌形态结构的影响
扫描电镜观察,SI作用金黄色葡萄球菌24h后,菌体表面部位出现皱缩、干瘪、扭
曲变形、囊泡状或不规则形状的突起以及缢痕等结构。
2、大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌超微结构的影响
透射电镜观察,SI处理4h后,金黄色葡萄球菌的细胞质开始固缩,14h后有明显
的质壁分离现象,并出现空腔,24h后细胞壁和细胞膜破裂,破裂处有内容物溢出。
3、大豆异黄酮对金黄色葡萄球菌细胞膜渗透性的影响
培养液电导率的改变可以反映细胞膜渗透性的改变。SI作用菌体1h后,培养液的
电导率开始增加,当SI作用菌体6h后,培养液的电导率变化率达到4.61%。表明菌体
细胞内有细胞质的渗漏。推测其原因可能是SI改变了细胞膜的通透性所致。
4、呼吸代谢抑制实验
该实验结果表明,大豆异黄酮和丙二酸、碘乙酸、磷酸钠的叠加抑制率分别为8.6%、
16.4%和22.1%,由于大豆异黄酮和丙二酸的叠加率最小,因此,大豆异黄酮主要是通
过抑制供试菌株糖代谢途径中的三羧酸循环途径而起作用。
5、大豆异黄酮对菌体蛋白质合成的影响
蛋白谱带分析结果显示,SI可抑制金黄色葡萄球菌的蛋白质合成,使其蛋白总量随
作用时间的延长呈下降趋势,尤其是较大分子量的蛋白含量下降显著,其蛋白量与对照
组相比减少了90.1%。
大豆异黄酮的抑菌活性及其机制的研究
6、大豆异黄酮对菌体DNA、RNA含量的影响
DAPI荧光染色结果显示,SI作用28h后,金黄色葡萄球菌菌体内的核酸含量呈明
显下降趋势,其中与对照组相比,DNA量减少了33.53%,RNA量减少了39.82%。
7、大豆异黄酮对菌体DNA拓扑异构酶活性的影响
SI能明显抑制拓扑异构酶I(TOPO
I和TOPO
SI在6.4mg/mL时完全抑制TOPOII活性,同时在3.2mg/mL时还能直接引起
pBR322DNA的双链断裂。
SI对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性,其抑菌机制可能是通过破坏细菌细胞壁及
I和TOPO
细胞膜的完整性、抑制细菌的呼吸代谢,同时抑制TOPO II活性来进一步抑制
菌体DNA、RNA和蛋白质的合成来实现的。
关键词:大豆异黄酮,抑菌机制,抑菌活性,拓扑异构酶,金黄色葡萄球菌
大豆异黄酮的抑菌活性及其机制的研究
Abstract
isoflavone(SI)isakindof metabolitesthe of
Soybean secondary duringgrowthsoybeans,
containedinthe and of asoneofthe
mainly cotyledonhypocotylsoybeanseeds,isregarded
has have
crude biological
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