大鼠谷氨酰胺转蛋白SNAT2的N末端区域对SNAT2定位于细胞膜上作用的研究.pdfVIP

q111 1811111121 膜上作用的研究 学科专业：动物学 学位申请人：孟雯 指导教师：张舟 摘 要 摘要 谷氨酰胺转运蛋白是中枢神经系统中一种重要的中性氨基酸转运蛋白， 对谷氨酰胺的跨膜转运十分重要。为了更方便地研究大鼠谷氨酰胺转运蛋白2 (SNAT2)在细胞膜上的表达与定位，利用亚克隆技术将增强型绿色荧光蛋白 blot和激光共聚焦电 达载体瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293Tcells)，用Western 子显微镜荧光检测技术鉴定SNAT2．EGFP的在细胞膜上的表达与定位。为了深 入研究SNAT2的N末端区域对SNAT2于细胞膜上定位的作用，利用定点突变 酶切、连接等方法将SNAT2于细胞质内的整个N末端即前74个氨基酸截去， 获得SNAT2DcIN-ter-EGFP。用Wememblot和激光共聚焦电子显微镜荧光检测技 1 术鉴定MG．SNAT2一EGFP和SNAT2 Dcls．t=-EGFP的在细胞膜上的表达与定位， DeI 于细胞膜上，与SNAT2．EGFP无差异，截去N末端的蛋白SNAT2DeIN．ter-EGFP mRNA的表 几乎没有表达且不能正常定位于细胞膜上；而SNAT2DeIN帕．EGFP 达量与SNAT2-EGFP和SNAT2 的整个N末端区域在翻译水平上对SNAT2的正常表达及于细胞膜上的定位起到 了至关重要的作用。 关键词t 谷氨酰胺转运蛋白；增强型绿色荧光蛋白；融合蛋白；表达；N末端 论文类型t研究报告 of SNAT2 Title：TheeffectN-terminaldomainofrat transporters glutamine on tocellmembranes locating MajorZoology Author：WenMENG Tutor：ZhouZHANG Abstract neutralaminoacid thecentralneural system Sodium-coupled transporters(SNATs)in all rolein amino aS small，neutralacids，such importanttransporting glutamine p!ayed todetect andlocalization and cellularmembranes．Inorder alanine，across expression oncellmembranes EGFP WaSsubcloned ofSNAT2 conveniently,anproteinsequence intoSNAT2’SC-terminusinthe