拟南芥ABA诱侧根减少突变体的筛选与基因克隆.pdf

摘要 侧根作为拟南芥胚后发育的重要器官，在拟南芥根构型建立中起着重要的作用。尽 管植物自身营养水平及外界生物、非生物环境条件对侧根的发生都有影响，但是目前对 这些因素特别是ABA(脱落酸)影响植物侧根生成的分子机理还知之甚少。因此对ABA 调控侧根发育的分子机理研究及关键基因的克隆意义重大。本研究是在设定ABA胁迫条 件下对侧根形成和发育相关突变体进行筛选，经过大量的筛选，得到表型比较稳定的与 入的突变体材料，并要到了该突变体，命名为raa2—2。 通过对突变体表型、遗传分析以及基因克隆和简单的功能分析，我们得到以下主要 的突变体(实验室提供)，进行在设定ABA胁迫条件下筛选，最终得到表型比较稳定的 培养基上，这四种突变体的表型都表现为与野生型无明显差异；在含5 ABA的MS(含 IaM ABA存在的条件下，突变体侧 的侧根数量少。(2)RAA2功能缺失突变导致在外源5 gM 根的形成受ABA抑制程度更大。用不同种类、不同浓度的糖处理突变体，它们的根系表 型与野生型的根系表型则没有明显差异。(3)0．5 ABA处理的萌发实验 ABA和1[aM gM 显示，突变体的萌发率比野生型的萌发率低，它们对ABA更敏感。失水和红外实验显示， 突变体的气孔丌度比野生型的气孔开度大。(4)遗传分析表明，突变体为单基因隐形突 行生物信息学分析得知其所编码的蛋白是一个具有多个跨膜结构域的膜蛋白，该膜蛋白 行分析，结果显示两个突变体中RAA2基因均被敲除。同时我们构建了该基因的回补载 体和超表达载体，以便进～步了解RAA2基因的功能。 综合上述结果，我们认为ABA调控根构型的信号转导过程是非常复杂的信号途径， 其作用机制可能与糖信号没有关系。同时发现该基因可能参与ABA调控的其它信号途 径。另外，构建RAA2基因的回补载体和超表达载体，为进一步了解RAA2基因的功能做 好基础工作。 关键词：ABA，突变体，根系构型，信号转导 ABSTRACT onrootarchitecture Asvital root an role post—embryonicdevelopmentorgan，lateralplaysimportant affected establishmentin wehaveknownthatlateralroot canbe by arabidopsis．Although development oneselfnutritionlevelandtheoutside environment plant biological，biological mechanismsoflateralroot aboutthese ABA(abscisicacid)，are development factors，especially poorly andstudiesonmolecularmechanismoflateralroot understood．Accordingly，keygenecloning ABAareof and