拟南芥胱硫醚--合成酶(D-AtCGS)基因在大肠杆菌中的表达及抗血清制备.pdfVIP

摘要 摘要 蛋氨酸作为含硫必需氨基酸，具有重要的生理功能。它不仅是蛋白质的构成成分， 而且是mRNA翻译的起始氨基酸。其下游产物硫腺苷甲硫氨酸是生物体内最重要的甲一 基供体，同时还具有转硫、转氨丙基的作用；其衍生物硫甲基甲硫氨酸是重要的硫转运 分子，与生物硫代谢密切相关。蛋氨酸能促进动物身体及毛发生长，对肝脏有保护作 用，并参与血球素的形成。缺乏时会引起食欲减退，体重迅速下降，还可引发脂肪肝、 卵磷脂缺乏、毛发变质、肌肉萎缩和贫血等现象。人和非类反刍动物不能自身合成蛋氨 酸，只能依靠日常膳食摄取，但目前主要作物的蛋氨酸含量普遍较低，大豆作为优质蛋 白来源，蛋氨酸含量仅占种子总蛋白的1．1％．1．6％。现有大豆品种资源蛋氨酸含量遗传 变异相当有限，给通过常规育种方法培育高蛋氨酸品种带来了很大限制，转基因技术的 出现，为该问题的解决提供了新的途径。 0-裂合酶、甲硫氨酸合成酶和S一腺苷甲硫氨酸合成酶的作用下，最终生成蛋氨酸。 CGS与TS的Km值相近，对OPH的利用效率取决于这两种酶的含量。大量的研究表 明CGS的表达受到底物的反馈抑制。因此，在利用基因工程手段进行调控时，需对 CGS基因的分子结构进行改造，减少底物反馈抑制作用。对拟南芥CGS的研究表明， 其N端99．128位的30个氨基酸与催化作用无关，将其删除后反馈抑制作用明显减弱， 过量表达这种N端删除的CGS基因更利于培育蛋氨酸含量提高的转基因植物。本实验 酸合成调控研究及高蛋氨酸大豆的分子育种，目前已成功获得了多个转基因株系。 ， AtCGS进行了原核表达，制备了抗血清，并利用制备的抗血清对本实验获得的多种转 blot及ELISA检测，结果 D-AtCGS基因大豆材料和都可模式植物百脉根进行了Westem 表明转基因植株的检测信号明显高于野生型对照，最终成功的建立了D-AtCGS转基因 植物的免疫学检测方法，本研究可为植物CGS表达调控研究及大豆和其他作物的CGS 转基因植株检测提供理想的技术支持。 ‘ 关键词蛋氨酸，胱硫醚一Y一合成酶，原核表达，转基因植物检测 Abstract Abstract functionsasallessentialamino Methionine(Met)hasveryimportantphysiological acid，and is at used levelsincellularmetabolism：asa theinitiationof．．， multiple proteinconstituent，in mRNAtranslation．theformof themost S-adenosylmethioine(SAM)isimportantmethyl—group alsofunctionsas and derivativesS- donor,meanwhile，it sulphuraminopropylcarder,the andrelatedto metabolism．Metcan methylmethioine(SMM)issulphur-carrier sulphur andfur of of hasafunctionof promotegrowthbody animals，and protecting form inthe oferythrocyte．Metd