拟康氏木霉胞外糖对小鼠的免疫增强活性研究.pdfVIP

山东大学硕士论文 摘要 生物活性多糖是目前研究广泛的一种生物反应调节剂。由于具有良好的免疫 调节及抗肿瘤能力，一些从真菌中提取的多糖已经开发成免疫增强及抗肿瘤药物 应用于临床。本实验室分离得到一株拟康氏木霉(Trichoderma ii pseudokoning SDTPl)，从其发酵液中提取出的胞外多糖成分，经过前期试验证实，对多种植 物病原菌有较强的拮抗作用；能促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖，同时还能提高 巨噬细胞的吞噬功能及其产NO的产量。本实验室进一步从拟康氏木霉胞外多糖 中分离纯化到一种均一多糖(TPSl．1)，分子量为31930 Da，单糖组成及摩尔比 为鼠李糖：木糖：果糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=16．2：14．4：1：25．8：23．6：48．1。 通过小鼠体外细胞试验及体内动物模型实验，研究了其对免疫细胞以及正常小鼠 和免疫低下模型小鼠免疫功能的影响。 1．体外实验中，用MTT法和ELISA法分别研究了TPSl．1直接及协同有丝 分裂源ConA或LPS对小鼠脾淋巴细胞的增殖及分泌IL．2的影响；分别用中性 红比色法、pNPP法和Griess试剂法测定了TPSl．1对腹腔巨噬细胞吞噬功能、 酸性磷酸酶的含量及NO含量的影响。结果表明，TPSl．1单独作用时，在 25-400I．tg／mL浓度范围内均能显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖，呈剂量依赖性；在 均达到极显著性差异；TPSl．1可提高小鼠脾淋巴细胞分泌IL．2，在100¨g／mL时 多糖处理组的分泌量与对照组相比提高了140．0％。TPSl．1可显著促进巨噬细胞 的吞噬作用，200,edmL多糖处理组与对照相比，吞噬活性提高了14．0％；在 范围内TPSl．1均能极显著地增加巨噬细胞酸性磷酸酶的活性，4001xg／mL处理组 与对照组相比，提高了137．0％。这些结果表明TPSl．1能激发巨噬细胞和脾淋巴 细胞的活性，对免疫细胞具有良好的刺激作用。 2．体内实验中，研究了TPSl．1对正常小鼠及免疫低下模型小鼠免疫功能的 影响。利用可损伤免疫器官，抑制体液免疫及细胞免疫，导致小鼠免疫缺陷的环 磷酰胺构建免疫低下小鼠动物模型。本实验中，模型鼠特异性细胞免疫、脏器指 数、细胞因子分泌、T淋巴细胞增殖、耐力等指标均低于正常小鼠，说明造模成 功。结果表明，50、100、200 mg／kg／day的TPSl．1灌胃处理7天，显著提高了 山东大学硕士论文 正常鼠血清中IL．2及n师．a含量，与对照相比，分别平均提高16．O％和17．0％； 增加了模型小鼠血清中IL．2及TNF—o【的含量，与阴性对照组相比，最高分别提 高10．O％和32．5％；TPSl．1能显著提高正常小鼠及免疫低下小鼠迟发型变态反应 的足趾增厚度，与对照相比，最高增幅分别达到97．0％和350．0％；TPSl-1能够 延长环磷酰胺致免疫低下模型小鼠游泳时间，对其脾淋巴细胞增殖和脏器指数均 有良好的提高和促进作用。以上结果表明，TPSl．1对正常小鼠及免疫低下模型 小鼠的体液免疫及细胞免疫均有良好的促进作用。 本研究证明，拟康氏木霉胞外多糖TPSl．1是一种良好的免疫调节剂，在增 强小鼠体液免疫、细胞免疫，或者特异性免疫和非特异性免疫方面，均有良好的 表现。它很可能具有良好的抗肿瘤作用，是一种潜在的生物反应调节剂。 关键词：拟康氏木霉；胞外多糖；免疫调节；免疫低下 Il 山东大学硕士论文 Abstract active isakindof modifier Biologicallypolysaccharide biologicalresponse is researchednow．Asoneofthemost ofthe (BRM)whichwidely impor