- 1、本文档共42页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
携带Ubc9基的病毒表达载体的构建及其在细胞中的表达.pdf
摘 要
背景与目的:细胞内存在多种蛋白质共价修饰方式,如乙酰化、磷酸化、泛素化、
甲基化等,它们对蛋白质发挥正常的生物学功能起着重要作用。近些年来几种小
的类泛素蛋白(ubiquitin.1ikeproteins,Ubls)接连被发现,它们与泛素在二级结构
上极其相似,且催化修饰过程的酶体系也具有很高的同源性,SUMO(small
ubiquitin.related
S切ⅥO化修饰调节多种生物学的过程,包括核质转运,转录活性调解,DNA修
复和复制,以及有丝分裂和减数分裂时染色体的行为。研究发现能被SUMO被
其修饰的蛋白有百余种,例如RanGAPl,PML,IkB
Q,c.Jun和p53等。SUMO
的生物过程至关重要。本研究构建含Ubc9基因的病毒表达载体,转染包装细胞
后使其产生病毒,收集病毒感染靶细胞,使细胞中的Ubc9基因过表达,以便于
深入研究Ubc9基因对细胞的作用。
方法:方法一:聚合酶链反应(PCR)扩增获取目的基因Ubc9,定向插入逆转录
染逆转录病毒包装细胞PT67;6418筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,
收获病毒感染BMSC细胞。用Westernblot方法检测Ubc9在BMSC细胞中的表达。
方法二:把Ubc9基因定向插入腺病毒表达载体。pemI酶切将穿梭质粒
毒质粒经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增。收集重组腺
病毒,感染HeLa,用Westernblot方法检测Ubc9在HeLa细胞中的表达。
结果:结果一:限制性酶切和测序鉴定证实Ubc9正确插入逆转录病毒表达载体。
6418筛选获得稳定产毒的抗性细胞克隆,收获病毒能有效感染BMSC细胞。
结果二:通过PacI酶切证实携带Ubc9基因的腺病毒载体构建成功,包
装出携带Ubc9基因的腺病毒能有效感染HeLa细胞。
结论:携带Ubc9基因的病毒表达载体构建成功,转染包装细胞后能包装出病毒
颗粒,收集的病毒能有效感染靶细胞。用Westernblot方法检测Ubc9在靶细
胞中可高表达。
硕士研究生:李薇(细胞生物学)
导 师:刘晓萍(教授)
关键词:Ubc9基因;逆转录病毒;PT67细胞:腺病毒;293细胞
Abstract
covalentmodificationof aS
Background0bjective:Severalproteins,such
rolein function
phosphorylation,acetylation,andmethylation,playimportantbiology
of some were have
protein.Recentyears ubiquitin—likeproteinsfound,they
similar structure、^,itlland
remarkablysecondary ubiquitintheyeovalentlyconjugate
toother inthesimilar like small
proteins multistepprocessubiquitination.111e
asthe members.Unlike
ubiquitin-likeproteinmodifiers(SUMO)haveemergedkey
which thesubstratefor
ubiquitylationprimaril
您可能关注的文档
- 戈壁异常球菌I0冷激蛋白的功能鉴定及异源表达.pdf
- 我国香菇主栽品分子图谱库的构建.pdf
- 我国鳑鮍亚科鱼遗传多样性及系统发育研究.pdf
- 戴云山国家级自保护区黄山松群落生态学研究.pdf
- 手足口病EV7病毒串联表位的免疫性研究.pdf
- 打顶及BSM对同品种烟草氧化胁迫的影响.pdf
- 打顶及仿生型信分子对烟草氧化胁迫的影响.pdf
- 扣囊复膜酵母菌性蛋白酶基因在解脂耶罗维亚酵母菌中表达和重组酸性蛋白酶的应用.pdf
- 扩展青霉TS44脂肪酶在毕赤酵母的表达、纯化及其催化外消旋萘普生酯化拆分的研究.pdf
- 扬州市城--乡续带上自然湿地植物群落特征及物种多样性.pdf
- 化学反应速率与平衡.ppt
- 企业会计信息质量问题及对策【精品发布】.doc
- 免疫学的应用高二上学期生物人教版选择性必修一.pptx
- 高中物理自由落体运动课题研究力学部分+课件+-2023-2024学年高一上学期物理人教版必修第一册.pptx
- 北师大版生物七年级上册 《细胞的基本结构和功能》第2课时CEP课件1.pptx
- Unit 4 Grammar and usage(教学课件)-高中英语牛津译林版(2020)选择性必修第三册.pptx
- 特异性免疫高二上学期生物人教版选择性必修1.pptx
- 期末复习课件专题9+物体的浮沉条件及应用(2)++2023-2024学年人教版八年级物理下册.pptx
- 其他植物激素高二上学期生物人教版选择性必修1.pptx
- 三大费用核算节税技巧【会计实务操作教程】.pptx
文档评论(0)