扩展青霉TS44脂肪酶在毕赤酵母的表达、纯化及其催化外消旋萘普生酯化拆分的研究.pdfVIP

摘要 中文摘要 本论文以扩展青霉TS414脂肪酶在毕赤酵母X．33的表达、纯化和重组扩展青 霉TS414脂肪酶在有机相中催化外消旋萘普生酯化拆分为主线，开展了以下几个方 面的研究： 瓶优化的基础上考察三种不同的甲醇流加策略对该菌进行罐上产脂肪酶的影响。溶 氧控制策略的酶活为104U／ml，酶产率为962Ud．h；变色酸法维持低浓度甲醇策略 Ud．h；甘油甲醇混合诱导过渡策略的酶活为 的酶活为443U／ml，酶产率为4614．58 倍。 S．100凝 其次，重组扩展TS414脂肪酶发酵液经过饱和硫酸铵沉淀、Sephacryl 胶过滤层析、PhenylScpharose疏水层析三个纯化步骤后达到电泳纯，酶液的比酶活 力由最初2988．03 重组TS414脂肪酶对外消旋萘普生的拆分效果与野生型脂肪酶相近。 最后，确立固定化重组扩展青霉TS414脂肪酶酯化拆分萘普生的最佳反应条件： 一、固定化条件：天津光复AB．8大孔吸附树脂、树脂与酶质量比为1：8、pH值为 9．0、固定化吸附时间1．5h、冻干1 h；二、酯化拆分体系：固定化酶量为0．069、外 消旋萘普生量为1．48mg、正丙醇量为7．73山、体系水含量为0．05％。在此条件下反 应120h，转化率及产物对映体选择性分别达到48．27％和98．01％。固定化重组扩展 青霉TS414脂肪酶酯化拆分萘普生的效果较理想。 关键词：脂肪酶发酵分离纯化萘普生固定化酯化拆分 Abstract taken 4 Thisthesishas the ofPenicillium TS41 expansum expression,purification inPichia andtherecombinantPenicillium TS414 lipase pastoH expansum in mediaas enantioselectiveesterificmion the lipase—catalyzed of(RS)一naproxenorgnic themainlinesandcarriedoutthe researches： following shakeflaskfermentionconditonsfor bacterial Firstly,the X33·-TS414··lipengineering were areas optimized．Conditionsfollows：pH：7．5；inoculated concentration：0．75％，flaskvolume：10％，rotation onthe differentmethanol werecarriedoutonthe eonditons，three feedingstrategies tank．The activitiesofDObased was1 fermentationlipase’S