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干扰素调节因子DNA结合结构域中赖氨酸残基的作用.pdf
摘要
摘要
factor
7,IRF.7)是IRFs中重要的成员
干扰素调节因子7(Interferonregulatory
之一,它主要在两个方面起重要的作用:调节干扰素的表达和参与抗病毒的免
疫反应。IRF.7是一个DNA结合蛋白,共有503个氨基酸,其中氨基末端1.151
个氨基酸为其DNA结合结构域(DNAbindingdomain,DBD),DBD在其与干扰
stimulated
素刺激应答元件(IFN element,ISRE)结合时起到关键的作
response
用。IRF.7的功能也可以通过包括磷酸化、乙酰化、泛素化和类泛素化的翻译后
修饰来调节。赖氨酸残基是乙酰化、泛素化和类泛素化的潜在修饰位点,所以
赖氨酸残基上的修饰可能是IRF.7进行功能调节的策略。IRF.7的DBD中分布
着5个赖氨酸,目前已有研究表明,部分赖氨酸残基的突变会对IRF.7的功能造
成影响,而DNA结合结构域中的个别赖氨酸残基的突变会使IRF一7几乎完全失
活。
本文通过定点诱变将DNA结合结构域内的赖氨酸残基突变为精氨酸残基,
构建了6个表达质粒,它们可以在大肠杆菌细胞中表达融合了His和FLAG标
签的IRF.7
DBD重组蛋白以及突变体蛋白。其中His,FLAG标签分别用于纯化
和检测;纯化这六个重组蛋白,并对它们进行定量;最后利用DNA.BIND微孔
板测定它们与ISRE的结合。结果发现IRF.7DBD与ISRE的结合具有特异性。
当赖氨酸突变型与野生型等量的情况下,与DNA结合的能力都变弱了。与野生
%,22%,28%和16%。本文的结果为研究赖氨酸残基在IRF.7结合活性中的
作用提供了实验证据,也为进一步利用DNA.BIND:微孔板检测DNA与蛋白的
相互作用提供了基础。
关键词:赖氨酸突变、干扰素调节因子7、DNA结合结构域、DNA.BIND微孔
板、DNA.蛋白相互作用
Abstract
oftheIRF
amember plays
factor family,which
Interferon 7(IRF.7)is
regulatory
andthe
is the ofinterferon
rolesintwo expression
regulating
important aspects.One
immune isaDNA-binding
is intheantiviral response.IRF一7
otherDarticipating
residuesof
151 aminoacid
N—terminal
aminoacids.The
503
protein.containing
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