整合素β4对人气管上皮细胞免疫信号传递的影响.pdf

本课题受国家自然科学基金资助 项目编号 workare NationalNaturalScienceFund This supportedby Project：NO 摘要 气道上皮作为沟通机体内外环境的第一道屏障，除发挥物理性 防御作用，更具有丰富的生物学功能，在气道局部微环境稳态维持 中发挥重要作用。越来越多研究认识到，气道上皮的结构完整性缺 陷或功能紊乱可能是哮喘和慢性阻塞性肺疾病等气道高反应性疾病 的启动环节。哮喘在本质上被公认为慢性炎症性疾病，而Thl／Th2 免疫应答失衡学说在哮喘众多发病机制中一直占据主流地位。气道 like 上皮细胞具有抗原呈递细胞的特性，对外表达TOLL样受体(Ton B7家族将免疫信号传递给T细胞。这在一定程度上影响T细胞免疫 平衡和气道局部的免疫状态。 整合素134(integrin134)作为形成半桥粒结构的中心组份，介导 气道上皮细胞与基底膜的牢固粘附，其正常表达是维持气道上皮细 胞“锚着依赖性生长的重要基础。哮喘患者气道粘膜镜检常有上 皮脱落、凋亡。本课题组前期工作已经证实哮喘病人外周血和气道 粘膜integrin 134在气道上皮细 134的表达均低于健康人群，且integrin 胞具有促增殖、抑凋亡、抗氧化损伤、减少免疫原卵白蛋白 134 表达缺陷可能是引起气道上皮结构和功能失稳态进而提高哮喘易感 性最终导致发病的关键因素。那么，integrinp4是否也能影响气道上 皮细胞本身免疫状态从而调节气道局部的免疫应答? 本研究拟合成integrin134的特异性小干扰RNA(siRNA)片段， l bronchial 在人支气管上皮细胞(human cells，HBECs)中沉 epithelial 默integrin 134基因表达，观察其对人支气管上皮细胞B7分子家族谱、 抗原OVA摄取后TLIⅥ的表达的改变，以及对共培养的人淋巴细胞 增殖的影响。以拓宽对integrin134生理功能的认识，进一步阐明哮 喘发病机制。 siRNA并瞬时转染至I-IBECs 第一部分合成特异性integrin134 目的：利用siRNA技术抑制integrin134在HBECs中的表达 siRNA片段，经脂质体转染人支气 方法：化学合成integrin[34 管上皮细胞株，采用real-time 率。 结果：real．time siRNA片 PCR和Western．blotting结果显示， 段转染后气道上皮integrin134表达显著下降。 siRNA片段可高效沉默人支气管上皮 结论：筛选的integrin[34 细胞株integrin134基因表达。 第二部分IntegrinB4基因沉默对支气管上皮细胞B7HI及 B7DC表达的影响 目的：观察integrin134基因沉默后HBECs共刺激分子B7家族 B7H1和B7DC的改变。 方法：运用real—time PCR和流式细胞术检测integrin134沉默组 和对照组B7H1和B7DC的mRNA水平及蛋白水平的改