文昌鱼组织蛋白D基因的克隆、鉴定及功能研究.pdf

文昌鱼组织蛋白酶D基因的克隆、鉴定及功能研究 文昌鱼组织蛋白酶D基因的克隆、鉴定及功能研究 摘要 D，缩写CTSD，EC3．4．23．5)是天冬氨酸蛋白酶家 组织蛋白酶D(eathepsin 族的重要成员，属于酸性溶酶体内切酶，广泛存在于脊椎动物、真菌、反转录病毒 和一些植物病毒中。CTSD主要是在溶酶体和内吞小体中对机体代谢产生的各种蛋 白质以及抗原进行分解，在脊椎动物免疫过程中起重要作用。文昌鱼 物祖先最接近的无脊椎动物，一直被认为是研究脊椎动物起源和进化的重要模式动 物。免疫系统的起源和进化是最近研究的热点之一。那么在文昌鱼中，CTSD的功 能是什么?是否有类似脊椎动物的蛋白裂解功能，能否参与无脊椎动物的先天性免 疫反应?为了回答上述问题，从青岛文昌鱼(Branchiostoma 有完整开放阅读框的组织蛋白酶D基因，并对该基因的结构、进化、表达和功能 eDNA，编 进行研究。结果表明，青岛文昌鱼中存在一个全长为1772bp的CTSD 码一个395个氨基酸的蛋白质，预测分子量为42．92kDa。序列分析显示该蛋白与 人的组织蛋白酶D同源性达到57．3％，具有典型的天冬氨酸蛋白酶家族结构，在 其N．末端存在45氨基酸序列的前肽(1．45位残基)，其中1．16位残基为信号肽， 织蛋白酶D聚为一支，提示文昌鱼AmphiCTSD基因较原始。 其次，我们对AmphiCTSD基因在青岛文昌鱼中的表达情况做了研究。成体的 实时定量和切片原位杂交实验表明，AmphiCTSD在文昌鱼的卵、后肠、肝盲囊和 皮肤黏膜系统中表达量较丰富，而在精巢中微弱表达。胚胎原位杂交结果表明文昌 鱼AmphiCTSD在其各个发育时期均有表达，尤其在细胞分裂旺盛部位表达较高， 在经上述外毒素诱导后12h和24h其表达水平至最低，而后逐渐上升。上述结果表 VlI 文昌鱼组织蛋白酶D基因的克隆、鉴定及功能研究 明，AmphiCTSD很可能与免疫反应相关。 抑肽酶等抑制剂抑制。对底物血红蛋白的酶切活性较低，可以将组蛋白H2A、大 球菌，暗示AmphiCTSD的酶切活性可能参与了宿主的免疫反应。 D；克隆；表达；组蛋白H丛； 关键词：文昌鱼；eathepsin 文昌鱼组织蛋白酶D基因的克隆、鉴定及功能研究 functionalof Din and analysiscathepsin Cloning，expression amphioxus Abstract a 3．4．23．5)islysosomalendoproteolyticaspartic CathepsinD(CTSD)(EC foundinendosomesof is to whichalsohasbeen macrophage．Itthoughtplay proteinase rolesinthe and ofanimals．Ithavebeen key developmentalphysiologicalprocess diversesourcessuchas liRle from mammals，but reported