杆状病毒携带的因拷贝数与重组蛋白表达效率关系研究.pdfVIP

1 摘要 杆状病毒．昆虫细胞多基因表达系统因为具有能容纳大片段外源基因插入、表达量 高、能同时表达多个基因、安全等特点，成为研究多蛋白复合物的最佳系统。MultiBac 系统是目前在杆状病毒多基因表达系统中，实现真核多蛋白复合物或者单个基因多拷贝 Cre／Loxp位点特异性重组进MultiBacmid，可同时实现多个基因表达。 理论认为，整合的拷贝数与基因的表达量会遵循剂量效应，即随着拷贝数的增加， 蛋白表达量会逐渐提高；也有研究认为基因拷贝数和蛋白表达量没有直接线性关系，但 是在杆状病毒表达系统中是否遵循基因剂量效应，目前为止尚未见相关报道。 本实验以．咖为目的基因，来探究基因拷贝数对杆状病毒在昆虫细胞中蛋白表达量 的影响。脚基因是一个广泛使用的报告基因，它可以在昆虫细胞中正常表达，经蓝光 体进行WesternBlot检测，并通过激光共聚焦和荧光分光光度计首先对两个极晚期启动 制的的表达量高1倍。然后对含不同基因．施拷贝数的重组病毒(一到四拷贝)在昆虫 细胞中的表达情况进行了定性和定量分析，发现蛋白表达量随着基因拷贝数增加而增 加，但不是呈线性比例倍数增长，当拷贝数由l增加3时，荧光蛋白表达量提高了近2 倍，从O．2％提高到了0．41％；拷贝数为4时，荧光蛋白表达量比单拷贝提高了20倍； 对2∞，49fp和6咖的重组病毒蛋白表达情况进行了比较，发现随着基因加拷贝数以 2倍形式增加时，四拷贝荧光蛋白表达量最高，到六拷贝时有所下降。因此在杆状病毒 表达系统中，通过提高基因拷贝数能显著提高目标蛋白表达量，而且只需要构建携带四 拷贝外源基因就可以获得最佳表达效果，为杆状病毒多基因表达系统高效表达外源基因 提供了理论基础和技术路线。 关键词：基因拷贝数，MultiBac系统，重组病毒，蛋白表达量 II ABSTRACT cellular as Mostof workthesubunitsof whicharcthebasicfunctional proteins proteincomplexes unit incell．Baculovirus hasbeena toolfor expressionsystem popular expressingeukaryotic multiprotein assemblieshavebecomea in methodofchoice itissaferandhas laboratories，because many higher level． expression MultiBae isausefulmethodfor of and system expressioneukaryotic multiproteincomplexes ofthesame insectcells．TheMultiBacisconsistedoftwosuch introducingmultiplecopies gene system modulartransfer and isderivedfrom andhasTn7 pl