柚苷酶发酵放大术及酶制剂的研究.pdf

柚苷酶发酵放大技术及酶制剂的研究 摘 要 柚苷酶是一种由α-L- 鼠李糖苷酶(EC 0)和β-D-葡萄糖苷酶(EC 1)组成的， 以水解柚皮苷至柚皮素为特征的糖苷水解复合酶，它在柑橘类果汁的脱苦、饮料增香、 黄酮类物质和鼠李糖的工业制备等方面具有重要的应用价值。然而由于柚苷酶发酵生产技 术的不成熟和制剂化工艺的缺乏，导致成品柚苷酶酶制剂价格高昂，这严重限制了柚苷酶 应用技术的开发，因此建立成熟的柚苷酶规模化发酵技术和合理的制剂化工艺具有重要意 义。 本论文以黑曲霉DB056 为柚苷酶产生菌，在研究了柚苷酶发酵放大之后，进行了柚苷 酶制剂化工艺的探索和优化，最后对得到的柚苷酶酶制剂进行了食品安全性检测及储藏稳 定性的探讨，主要实验结果如下： 柚苷酶7 L、20 L 和200 L 规模的逐级发酵放大研究表明，随着发酵规模的扩大，柚 苷酶的两种组分：α-L- 鼠李糖苷酶与β-D-葡萄糖苷酶的酶活力水平会有一定的波动，但酶 活力变化趋势基本一致；在200 L 规模的发酵中，α-L- 鼠李糖苷酶与β-D-葡萄糖苷酶的最 高酶活力分别为1069 U/mL 和727 U/mL ，超过了7 L 和20 L 规模发酵过程中柚苷酶的活 力水平。实验成功实现了黑曲霉DB056 产柚苷酶200 L 规模的发酵放大，显示了该菌株良 好的发酵性能和工业应用价值。 柚苷酶发酵液经冷冻离心、除菌过滤、超滤浓缩及喷雾干燥工艺之后便可得到柚苷酶 固体酶制剂。柚苷酶浓缩发酵液喷雾干燥中选择麦芽糊精为助干剂，固形物含量为27% ， 以α-L- 鼠李糖苷酶回收率为标准，在单因素实验的基础上，采用响应面分析法对喷雾干燥 参数进行优化，得到最佳喷雾干燥条件为：进风温度111.3℃，进料速度161.5 mL/h，热风 流量5.1 m3/min ，出风温度60℃，雾化器压力0.4 MPa ，在此条件下，α-L- 鼠李糖苷酶回收 率为79.7% 。采用确定的工艺和参数条件进行柚苷酶酶制剂制备，得到的酶制剂中α-L- 鼠 李糖苷酶活力可达19000 U/g，总回收率为78.1% ；β-D-葡萄糖苷酶的活力达到4700 U/g ， 总回收率为28.3% ；酶制剂含水量7.5% 。 通过检测，本研究中制备得到的柚苷酶固体酶制剂的菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌 以及重金属含量的检测结果完全符合食品工业用酶制剂的安全标准。 温度、空气和湿度对柚苷酶酶制剂的储藏稳定性影响较大，光照对其影响不明显。柚 苷酶固体酶制剂在-20℃、真空、避光条件下保存70 d ，α-L- 鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶 活力的保留率分别为97.6%和86.0%。 本研究实现了柚苷酶200 L 规模的发酵放大，建立了柚苷酶制剂化工艺流程并优化了 过程参数条件，检测了柚苷酶固体酶制剂的食品安全性，探讨了柚苷酶酶制剂储藏稳定性 的影响因素，为规模化工业生产柚苷酶酶制剂及柚苷酶应用技术的开发奠定了基础。 I 关键词 黑曲霉，柚苷酶，发酵放大，α-L- 鼠李糖苷酶，β-D-葡萄糖苷酶，喷雾干燥， 酶制剂 II Studies on Scale-up Technology of Naringinase Fermentation and its Enzyme Preparation Abstract Naringinase is a kind of glycosidase complex, which composed of α-L-rhamnosidase (EC 0) and β-D-glucosidase (EC 1). Naringinase can specifically hydrolyze naringin into naringenin and it has many important application value, such as debittering of citrus fruit juice, increas