水产品中常见重致病菌基因芯片技术的研究.pdf

摘要 摘要 、 致病菌引起的水产品污染问题是影响水产品安全的关键问题之一，严重危 害着人类的健康。近年来由于水产品致病菌引起的食物中毒事件不断增加，为 了更好预防水产品致病菌中毒事件的发生，最关键的是寻找快速而准确水产品 致病菌的检测技术。 由于水产品的味道鲜美，营养价值高，近年来受到广大消费者的青睐。但 是由于水产品而引起的食物中毒事件已经引起了世界范围内的广泛关注，对水 产品致病菌实现快速检测具有现实意义。本文以水产品中11类重要致病菌作为 研究对象，运用寡核苷酸芯片技术在基因水平上进行分子学检测方法的研究。 利用16S．23SrRNA基因间区(Internaltranscribed spacer,ITS)设计引物探针作 为正对照，以沙门氏菌的invA、副溶血弧菌toxR、霍乱弧菌哟：E、单增李斯特 氏菌htyA、金黄色葡萄球菌删c、化脓性链球菌speB、创伤弧菌rpoS、志贺氏 菌ipaH,小肠结肠炎耶尔森氏菌口玎基因作为靶基因，奇异变形杆菌、普通变 形杆菌的16S．23SrRNA基因作为靶基因筛选适合这11种菌的特异分子标识， 并研制水产品中重要致病菌检测基因芯片。 靶基因，设计了种属特异性探针，经过反复筛选验证得到特异探针26条。另外 设计了背景检测探针1条，荧光探针1条，以ITS为靶基因设计11类水产品致 病菌的通用探针l条，共计29条。之后点制基因芯片、进行了杂交液研制、杂 交温度、杂交时间、PCR扩增标记等优化实验，并对芯片的特异性及灵敏度进 行评价，同时进行模拟样品实验及实际样品实验对芯片的应用性能进行评价。 本研究建立了使用寡核酸芯片检测水产品中常见重要致病菌的方法。该方 法不仅操作简便、快速、特异性强、灵敏度高，而且具有良好的应用价值，为 水产品常见致病菌检测提供了一定的理论依据和技术参考，并为食品致病菌检 测提供一定的依据，在微生物检测领域具有广阔的应用前景，如可以用于临床 样品检测、环境监测、出入境检验检疫等。 关键词：水产品；寡核苷酸芯片；杂交液；靶基因 Abrest Abstract The contaminationcaused isoneofthecrucial fishery product bypathogens factorstothe food recent accidents safetytoday．In years，foodpoisoning resulting from contaminated are witheach fishery productincreasing passingyear．To overcomethis efficientandaccurate detectionof problem，the pathogen fishery shouldbeachievedfor product diseasecontrolandfood poisoningprevention． aimsto This detecteleven and amolecular study importantpathogens develop detectionmethodof