激素对海岛棉再体系建立的影响及转BT基因的研究.pdfVIP

转基因生物新品种重大专项课题 (项目编号：2013ZX008005．008) 课题主持人：曲延英 (新疆农业大学) 万方数据 B7_基因 摘要 本研究为了进一步优化海岛棉遗传转化体系，分别以新疆主栽品种新海25号、新海21 号、新海30号和新海14号下胚轴为外植体，通过不同浓度激素5种组合配置培养基，诱导 胚性愈伤组织，并进一步发育成苗。通过农杆菌介导法转化Bt基因，获得转基因再生植株。 本研究主要结构如下： 2．0mg·L～NAA+0．1mg·L‘1KT为海岛棉愈伤组织诱导最佳的激素配比；在此激素诱 导下4个品种都能成功得到再生苗。 海岛棉在愈伤组织分化和体细胞胚胎发生阶段时，培养基中的NH4NO。浓度增加为1．65 g·L一，KN0。为3．8g·L。1时胚分化率和胚分化能力均达最大值均达到最大值。有利于体胚 发生。 农杆菌介导海岛棉胚性愈伤组织，成功获得转Bc基因的海岛棉转基因植株。对获得的 转口t基因的转基因苗进行功能验证。先用GUS组织化学检测方法证明了，外原片段成功转 入。通过PCR检测，对经卡那霉素筛选获得抗生植株进行验证初步证明B￡基因已转化到再 生的棉花植株中。转基因植株进行RT—PCR检测，结果显示Bt基因在转基因植株中也能够 正常表达。B￡基因在转基因海岛棉中能稳定表达。 关键词：海岛棉；NAA；胚性愈伤；再生体系；遗传转化；研 万方数据 The ontheHormonesInflnenceontheGenetic Study TransformationBuiltandTransferBTGenein Gossypium Barbadense ABSTRACT Inthis ordertofurther theislandcotton transformation study,in optimize genetic system， fourcottoncultivarsin 1、xinhai30、xinhai1 Xinjiang(xinhai25、xinhai24)asexperimental fivecombinationsofdifferentconcentrationsofhormones materials，Over media, configure callus further into transformed Embryogenicinduction，Anddevelopseedlings．Bt by isstructuredasfollows： Agrobacterium—mediatedgene，transgenicplantregeneration．Thestudy 2．0 NAA+0．1KTfor barbadensecallusinductionbestratioof mgL‘1 mgL