烟草中NAC类录因子基因的克隆与分析.pdfVIP

摘要 烟碱是烟草根系合成的次生代谢产物，是烟草特有的生物碱。打顶以后，烟株体内烟碱 含量大量积累，然而对造成烟株体内烟碱含量升高的原因以及烟碱合成的调节机制并不清 楚。打顶前后烟碱合成能力的巨大差异，是用来研究调控烟碱合成分子机制的最佳时期，通 过筛选烟株打顶前、后根尖组织的差异表达的基因将有新的发现。 植物中含有大量的转录因子基因，在调控植物生长发育和逆境胁迫应答中起重要作用。 全长eDNA序列，对于研究调控烟碱生物合成的分子机制有重要意义。本实验主要结果如下： 顶24h后表达水平下降。 读框架长度为936 l 1个氨基酸，具有NAC转录因子家族典型的保守结构域。 bp，编码3 杂交对烟草打顶前、后根尖组织中NtNAC-R1的表达模式分析表明该基因在烟株打顶后2—4 h表达水平下降，随后上升。 功表达目的蛋白，且目的蛋白以包涵体形式存在。 (5)构建了NtNAC-R1基因的过量表达和反义抑制植物遗传转化载体，得到了该基因的反 义抑制转基因植株。RT．PCR分析反义抑制转基因植株中烟碱合成相关基因PMT、ODC的 表达模式表明这两个基因表达量下降。 关键词：烟草；NAC类转录因子；基因克隆；表达 Abstract Thenicotineisa metabolite inthe secondary synthesizedroot，a tobacco-specific alkaloid．After contentofnicotine thereasonthe topping，the accumulated，but why content increasedandthe mechanismofnicotinearenot regulation clear．Therefore， subtractive was toconstructaeDNA ofroot suppressionhybridizationadapted library beforeandafter andscreen has tip topping differentially expressedgenes，whichgreat torevealthemolecularbasisreferredtothe of onthe potential impact topping nicotinecontent． Therearea numberof factor in and all large transcriptiongenesplanttheyplay rolein andstress importantregulatingplantdevelopmentresponse．AP2／EREBP、 bZIP、MYB、WRKY和NACarecommon factors this transcription