猪霍乱沙门菌强株与弱毒株基因组和蛋白质组差异分析.pdfVIP

刘杰：猪霍乱沙门菌强毒株与弱毒株基因组和蛋白质组差异分析 猪霍乱沙门菌强毒株与弱毒株基因组和蛋白质组 差异分析 {I[1llllI I IIJ rllIIIIlffI 11Illj 研究生：刘杰 导师：焦新安教授 中文摘要 enterica 猪霍乱沙门菌(Salmonella s“却．enterica 龄仔猪副伤寒的主要病原。仔猪副伤寒可一年四季发生，多与猪瘟混合感染，具有较高 发病率与死亡率，可造成重大损失。猪霍乱沙门菌同样对人类具有较高的致病性，常导 致人发烧及败血病等全身性感染症状。此外，当前流行的猪霍乱沙门菌的多重耐药性严 重，对人类健康的潜在威胁很大，因此猪霍乱沙门菌的防控备受关注。 本研究利用抑制差减杂交技术(SSH)构建了猪霍乱沙门菌强毒株与弱毒株的差减文 库，对差异序列进行了初步分析。利用蛋白质二维电泳技术(2一DE)以及实时荧光定量 PCR分析了两菌株间相关蛋白的表达差异。 1猪霍乱沙门菌强毒株与弱毒株．扛pStl差减文库的构建及差异基因筛选 利用抑制性差减杂交技术对猪霍乱沙门茵强毒株C78．2与弱毒株C500进行基因组 片段的差异分析，成功构建了差减文库。经Dot-blot筛选后，对片段进行测序和同源性 弱毒株C500致弱机理提供了重要材料。 2猪霍乱沙门菌强毒株与弱毒株比较蛋白质组学初步研究 利用蛋白质二维电泳技术对猪霍乱沙门菌强毒株C78-2和弱毒株C500的菌体蛋白 蛋白点进行了质谱分析，共有4个蛋白鉴定成功，成功率为80％。这些蛋白分别是CheY 白是CheY蛋白的磷酸化酶，是细菌趋化性的调节因子。细菌铁蛋白是一种铁储存血红 素蛋白，与储存机体中过剩的铁，避免铁离子造成的细胞毒性有关。OsmY蛋白是细菌 2 扬州大学硕士论文 的一种周质蛋白，与细菌抵抗高渗透压环境有关。核糖．5．磷酸异构酶(RpiA)是一种磷酸 戊糖途径和卡尔文循环中必需的酶。这些研究结果为了解猪霍乱沙门菌遗传进化、致弱 机理等提供了一定的理论基础。 3实时荧光定量PCR检测猪霍乱沙门菌相关蛋白体外表达差异 根据猪霍乱沙门菌强毒株C78-2和弱毒株C500基因组和蛋白质组学比较结果，共 时设计了猪霍乱沙门菌gmk的引物作为内参。提取两株猪霍乱沙门菌体外液体LB培养 中的表达量显著高于C500，与预期结果相符。 芍强毒株与弱毒株基因组和蛋白质组差异分析 3 、dProteomebetween 。j：?≯：1d AttenuatedStrains iolidate：JieLiu Advisor：Prof．XinanJiao Abstract themain of for pathogenPiglet’Sparatyphoid ，己一j假Choleraesuis)is occur ．1 Call the andcal．1_semixedinfections