泛素化调控Ra家族GTP酶水平与活性的研究.pdfVIP

摘要 摘要 Rab蛋白是小分子GTP结合蛋白家族(smallGTP．bindingproteins)Ras超 家族中最大的亚家族，有大约80个成员。与Ras蛋白类似，Rab蛋白可以调节 细胞分化，增殖，凋亡，DNA的复制与转录，组蛋白修饰和核小体装配以及细 胞骨架的形成，主要依赖囊泡途径调节细胞内信号传导，从而在肿瘤的发展中起 着重要作用。 部分Ras超家族成员如RhoA，Racl，RaplB已证实会被泛素化修饰，但是目 前对Rab家族泛素化调控方面的系统性研究还很少。 本文将人源的Rab家族成员分别克隆连入带有Flag标签的哺乳动物细胞表达 载体中，测序鉴定并表达验证其正确性。至今已成功克隆出了62个Rab家族成 员。同时，系统筛选检测了Rab家族成员的蛋白水平能否被Smurfl、Smur￡2、 个Rab家族成员的蛋白水平会C2．WW-HECT家族泛素连接酶的某些成员所调 控。 此外，通过进一步研究Smurfl对RabSa蛋白水平的调控与其E3泛素连接酶活 性是否相关、蛋白酶体抑制剂对其降解的抑制作用、Smurfl与RabSa在细胞内和 体外条件下的相互作用以及体内体外泛素化情况等方面，证实了Smurfl可以直接 素化调控在RabSa参与的受体内化和非受体内化的信号通路，细胞骨架的运动和 肿瘤细胞的分化迁移等功能中的生物学意义仍需要进一步探索。 关键词：Rab家族蛋白；E3泛素连接酶；Rab5a VI Abstract Abstract of of TheRab isthe the GTP-binding family biggestsubfamilysuperfamily OVer80members．SimilarasotherRas members，the comprises family proteins，that Rab alsofunctionasmolecular are invesicle switches，and family important transport， rolesin cellular suchas therefore，Rabproteinsplaykey regulatingprocesses and differentiation,proliferation,apotosis，DNAreplicationtranscfiption，nuclear and alsobeen cytoskeletonformation．Additionally,Rabproteins reported 嬲semblg cancer cell thathave roleinthe progressionthroughregulatingsignaling important via or aresulst，Rab trafficking—dependenttrafficking—independentpathway．As membersbecomethenew ofcancer infuture． might target therapy