玉米WRKY转因子基因的克隆及耐逆性研究.pdfVIP

摘 要  WRKY  转录因子主要存在于植物中，其家族成员广泛参与植物生长发育、代谢 以及对生物和非生物胁迫的反应。本研究利用逆境因子 ZmWRKY33,ZmWRKY57 和  ZmWRKY62基因进行胁迫诱导，在此基础上从玉米中克隆这三个 WRKY基因,并对其 耐逆性功能进行了初步的研究。结果如下： 1.利用逆境因子干旱、高盐和低温对 ZmWRKY33，ZmWRKY57 和 ZmWRKY62三 个基因进行诱导表达分析，结果显示三个基因均受逆境因子干旱、高盐和低温的诱导 表达。 2.克隆了三个玉米 WRKY 基因，ZmWRKY33，ZmWRKY57 和 ZmWRKY62。它们 分别编码 307 个氨基酸残基、311 个氨基酸残基和 306 个氨基酸残基，都有 1个高度 保守的 WRKY 结构域，锌指结构域都为典型的C H 。 2 2 3.构建了过表达载体 （p­ZmWRKY33）,利用农杆菌介导的方法转化晚晴粳稻愈 伤， 获得 20 株 T 代过表达株系。T  代过表达株系的耐逆性功能研究表明，ZmW  RKY33  0  1  具有增强水稻耐干旱、高盐和低温的耐受性。 4.通过构建融合表达载体 PRTL2­ZmWRKY33­mGFP，PRTL2­ZmWRKY57­mGF  ­P 和 PRTL2­ZmWRKY62­mGFP,采用基因枪法轰击洋葱表皮细胞进行亚细胞定位分 析，结果显示 ZmWRKY33,ZmWRKY57 和 ZmWRKY62 与 GFP 载体的融合蛋白都定 位于细胞核中，说明 ZmWRKY33，ZmWRKY57和 ZmWRKY62 蛋白都具有转录因子 的核定位信号特征。 +  +  5.构建了过表达载体 （p­ZmWRKY57(bar )和 p­ZmWRKY62(bar )）和双链 RNAi  +  +  载体（p1301 (2ZmWRKY57i­bar )和 p1301 (2ZmWRKY62i­bar ),转化农杆菌,可用于 下一步玉米转化。 关键词：玉米，WRKY基因, 遗传转化，耐逆性 I  Abstract  WRKY transfactors are involved in responses to biotic and abiotic stresses, and in  regulation diverse developmental processes. Three WRKYgenes, designated ZmWRKY33,  ZmWRKY57 and ZmWRKY62, were responsive to stress tolerance and isolated in maize.  Their  functions  in  plants  were  explored  preliminarily  in  this  study.  The  results  are  summarized as follows:  1. ZmWRKY33,ZmWRKY57and ZmWRKY62 were allresponsive to drought、hight salt  and cold stresses.  2.Three WRKYgenes, ZmWRKY33, ZmWRKY57 and ZmWRKY62, were isolated.  ZmWRKY33, ZmWRKY57 and ZmWRKY62 dispartly encode 307, 311 and 306 amino acid  residues, allcontaining only one conserved WRKYdomain with a zinc finger motif of  C2H2.