泛素化调控Ra超家族GTP酶水平与活性的研究.pdfVIP

摘要 摘要 Ras超家族GTP酶作为分子开关，在细胞内众多的生理生化调节过程中起 着关键作用，包括基因表达、细胞的生长和分化、细胞周期、细胞迁移、膜泡运 输、细胞核与细胞质之间的物质运输等方面的调控。许多Ras超家族成员与人类 多种肿瘤的发生发展有着密切的关系。Ras超家族有大约150个成员，其中部分 已经证实会被泛素化修饰，并且这种泛素化修饰对于调节细胞的生理生化功能起 着重要的作用，我们在前期研究中也发现一些该家族成员可以被泛素化降解。因 此，泛素化这一修饰方式作为调控Ras超家族蛋白水平与活性的一种机制，在 Ras超家族蛋白所参与调控的各种信号通路中可能有着非常重要而广泛的意义。 但是目前对Ras超家族泛素化调控方面的系统性研究还很少。 本文将人源的Ras超家族成员分别克隆连入带有Flag标签的哺乳动物细胞 表达载体中，测序鉴定并表达验证其正确性。至今，已经成功克隆出了91个Ras 超家族成员。同时，系统筛选检测了C2．WW-HECT家族泛素连接酶成员Smurfl、 18个Ras超家族成员的蛋白水平会被C2．WW-HECT家族泛素连接酶的某些成员 所调控。 此外，通过进一步深入研究Smurfl对RhoB蛋白水平的调控、蛋白酶体抑制 剂对其降解的抑制作用、Smurfl与RhoB在细胞内和体外条件下的相互作用以及 体内体外泛素化情况等方面，证实了Smurfl可以直接与RhoB结合泛素化调控 RhoB的降解。这这种泛素化调控在RhoB所参与的信号通路和细胞生长分化以及 凋亡等功能中的生物学意义正在进一步的探索之中。 关键词：Ras超家族蛋白；E3泛素连接酶；RhoB Abstract Abstract TheRas ofsmall as superfamilyguanosine molecularswitchesand rolesin awide ofcellular playkey regulating range processes and includinggene differentiation，cell expression，cellgrowth cycling，cellmigration, and humanRas endocytosis,exocytosis transportion．The nucleocytoplamsic superfamily over150membersand ofthemareinvolvedin comprises many hasbeen thatsomemembersofRas small tumorigenesis．Itreported superfamily GTPasesuchasRhoAand lBcouldbe that Rap ubiquitinated,indicating functionasa mechanisminsome to ubiquitinationmay functions general biological the