泛素化调控Ra超家族GTP酶蛋白水平与Nedd4介导Ar11泛素化降解的研究.pdfVIP

摘要 Ras超家族GTP酶是细胞内信号转导通路中重要的分子开关，参与调控着众 多的生理生化过程，包括基凶表达、细胞生长分化、膜泡运输、细胞核质信息交 换、细胞运动、细胞周期等。Ras家族中的许多成员与人类肿瘤癌症的发生于发 展有着密切关系，为人们所关注。现已证实，Ras超家族中的不少成员可以被泛 素化修饰，如RhoA和RaplB。这种泛素化修饰和传统的GTP／GDP结合形式转化 经典途径一同影响着小G蛋白的表达水平和活性，对于调控细胞的各种生理生化 作用起着重要作用。 本文中，我们希望通过相关实验，系统性地了解Ras超家族GTP酶泛素化调 控机制和生物学功能。将人源的Ras超家族成员克隆到带有Flag标签的哺乳动物 细胞表达载体中，计划构建Ras超家族所有成员的完整质粒库。目前，已经成功 克隆出大多数的Ras超家族成员。对已构建出来的Ras成员，我们用C2．WW-HECT 家族泛素连接酶成员对其进行初步筛选：检测五种E3泛素连接酶对Ras蛋白水平 的影响。经过系统性的筛选，我们比较肯定的结果是：有20多个Ras超家族成员 的蛋白水平受Nc2．WW．HECT家族泛素连接酶的影响而下调。 为了确定初筛的结果，我们选取其中的一个阳性结果Arll和对应的E3 Nedd4．1，进行深入研究。通过Nedd4．1对Arll蛋白水平的调控、溶酶体抑制；『||对 其降解的抑制作用的研究，我们确定了Nedd4．1对Arll蛋白水平具有下调的作用， 并通过溶酶体途径完成。其次，Nedd4．1与Arll在细胞内和体外条件下的相互作 用以及体内体外泛素化情况等方面，也证实了Nedd4．1可以直接与Arll结合，并 泛素化调控Arll的降解。 Nedd4．1 关键词：Ras超家族蛋白；E3泛素连接酶；Arll； Abstract Abstract asmolecular Ras ofsmallGTPases switches，the Acting superfamily playkey rolesin awide ofbiochemical regulatingrange processes，includinggeneexpression, cell and and differentiation，vesicular growth transport，exocytosis nucleocytoplamisc cell membersofRas such transportion,cellmigration,andcycle．Many superfamily as famous andfounder Ras，a oncogene memberofRas areinvolvedin superfamily ofsomeRas asRhoAand tumorigenesis．Recently,ubiquitinationprotein,such l been that exerts B，have Rap reported，indicatingpost-modificationbyubiquitin rolein ofRassmallGTPas