泥鳅中DMRT基因的克隆、表达和选择性剪接分析.pdfVIP

摘要 具有一个高度同源的区域，称为DM基序。该基序可以与DNA进行序列特异性结合。 进一步的研究发现在哺乳类、鸟类、爬行类以及鱼类等脊椎动物中也存在具有DM基序 andMab一3related 的基因，称为DMRT(Doublesex transcription 和Mab．3相关的转录因子)基因家族。其中Dmrtl基因是迄今为止该家族成员中研究最 为深入的转录调控因子之一，也是目前发现的第一个在种属间具有进化保守性的性别分 化相关基因，在动物性别决定过程中发挥重要作用。鱼类在脊椎动物系统进化中处于承 前启后的地位，是性别决定研究的重要载体。因此对鱼类中Dmrtl基因相关信息的研 究，不仅有助于了解Dmrtl基因的进化、作用方式及其具体功能等，更有助于揭示 鱼类中性别决定及分化体系的运行机制，进而促进阐明脊椎动物的性别决定和分化体系 的进化历程。 本研究根据已经公开发表的相关Dmrtl基因资料，针对保守序列设计了一对简并引 拼接形式，共得到六条Dmrtl基因，分别记为MaDmrtlal(2162bp)、 993 840 MaDmrtla3(1bp)、MaDmrtla4(848bp)、MaDmrtl6(1bp)和MaDmrtlc(666bp)， 整的5个外显子，编码267个氨基酸，其差异主要在于3’非翻译区长度和序列不同； 子，保留了一段长36bp内含子，编码182个氨基酸。 为了研究两种泥鳅Dmrtl基因在成体不同组织和胚胎发育不同时期的时空表达模 式，采用了半定量、实时荧光定量RT-PCR、组织原位杂交和胚胎整体原位杂交技术。 结果表明：泥鳅Dmrtl基因只在精巢中强烈表达，而在卵巢中不表达或只有极微弱表达， 这与其它物种中的研究结果相一致；在胚胎发育的各个时期泥鳅Dmrtl基因均有表达， 但表达强度又各不相同，呈现先上升后下降的表达趋势。综上所述，可推断泥鳅的Dmrtl 与雄性性腺分化和发育具有明显的相关性。原位杂交试验结果显示：未成熟的生殖细胞 (卵巢的卵原细胞、初级卵母细胞，精巢中的精原细胞和精母细胞)中表达，据此推测 泥鳅Dmrtl基因可能调控泥鳅性腺的发育和分化；整体胚胎杂交表明泥鳅Dmrtl基因在 体节形成期的体节中大量表达，之后一直到尾芽期的胚胎脊柱中都有很强的阳性杂交信 号，孵出期以后Dmrtl基因的表达主要集中在泥鳅的脊柱、体节和头部。这些结果为阐 述Dmrtl在脊椎动物体内对性别决定和性别分化的作用奠定了基础。 关键词：泥鳅，Dmrtl基因，选择性剪接，RACE，原位杂交 Abstract and wasidentifiedthe bchvcellthe The homologousanalysis DM(DoublesexMab-3)domainby 8ex andMab-3in doublcsex(dsx)inmelanogaster determininggene Drosophila theDNAdomain DM act雒transcriptionregalators．with conferring domain-confininggenes DNA DM havebeenidentified zinc domain-containiIlggenes finger-likebindmg．More sequenco-specific and novel wasidentifiednamed fromverteb