冬枣黄酮的提取离及抗氧化、抑瘤活性研究.pdfVIP

冬枣黄酮的提取分离及抗氧化、抑瘤活性研究 摘 要 冬枣(Zyzyhpusjujuha dates)为鼠李科枣属植物枣树(ZyzyhpusjujubaMill)的 果实，原产于我国渤海地区、黄河三角洲腹地，现在山东、河北等地大面积种植， 是我国特有的一种鲜食果品。冬枣营养价值很高，富含各种维生素、黄酮类、环 腺苷酸等。冬枣季节性很强，皮薄、水分含量高，不易保存。多项流行病学研究 结果表明，蔬菜和水果的摄入量与心血管疾病、癌症等慢性疾病的发生率呈负相 关。水果和蔬菜中的植物化学物质尤其是黄酮类作为主要的生物活性物质，在保 护机体健康方面起着重要的作用。黄酮类物质广泛存在于水果、蔬菜、茶叶等各 类植物之中，具有较强的抗氧化、抗过敏、消炎、抑菌、抑制肿瘤生长等作用。 越来越多的证据表明，低浓度的黄酮或2一羟基黄酮可以改善阿霉素的疗效。黄 烷酮和2一羟基黄酮可能具有抑制体内肺肿瘤发展的作用，而没有任何明显的毒 性迹象。冬枣富含黄酮类物质，实验室研究显示冬枣黄酮提取物具有很强的抗氧 化活性，可以减少脂质过氧化，但迄今为止鲜见有关的冬枣活性的研究。 本研究在提取分离、纯化冬枣黄酮的基础上，采用模拟体系观察了冬枣黄酮 的抗氧化活性及作用机理；并通过对荷瘤小鼠补充不同剂量冬枣黄酮提取物，观 察其抑瘤作用，并探讨其可能的作用机制，为肿瘤的营养干预和开发利用冬枣资 源提供理论指导。 1．以总抗氧化活性作为冬枣黄酮提取效果的指标，以乙醇为提取剂，通过 加热振荡提取法、超声波辅助提取法以及微波辅助提取法的单因素实验，分别筛 选出影响三种提取法提取效率的主要因素，并采用正交试验法优化出三种提取法 的最佳提取条件，通过比较三种方法的提取效率优化出冬枣黄酮的提取工艺。优 化的总黄酮提取工艺为：萃取时间20sX9(每次提取20s，共提取9次)，微波 功率468W，乙醇浓度75％，料液比1：20。在此条件下，总黄酮的提取率为1．46％。 2．用5种国产大孔树脂对冬枣黄酮进行了静态吸附与解析试验。结果表明， X-5型树脂最适于纯化冬枣黄酮。通过动态吸附试验确定了X-5型树脂纯化冬枣 黄酮的最佳工艺为：先用2倍柱体积的50％乙醇液洗脱、再用1．5倍柱体积的70％ 乙醇液进行梯度洗脱，洗脱率达到82．42％。 3．冬枣黄酮乙醇萃取物(ECF)，乙酸乙酯萃取物(ETF)、正丁醇萃取物 在一定浓度范围内呈良好的量效关系。ECF、ETF和WF均能有效的抑制Fe2+ 诱导的大豆磷脂模拟膜脂质体过氧化，减少丙二醛的生成：且均能有效地推迟 cu2+诱导的血清脂蛋白氧化修饰的启动时间，抑制脂蛋白的氧化进程，在一定浓 度范围内呈良好的量效关系。 助于维持细胞的正常结构和功能；DJF可有效抑制Fe2++H202诱导的小鼠肝组 力；降低肝线粒体的肿胀度；降低H202诱导的小鼠RBC溶血。剂量一效应关系 较明显。 5．DJF对小鼠Slso移植瘤的生长有一定的抑制作用，在100-400 mg／Kg·d 剂量范围内，抑瘤率为20．15％一30．01％。DJF可促进荷瘤小鼠肿瘤组织凋亡促 进基因Bax的表达，同时减少凋亡抑制基因Bd一2的表达，升高Bax与Bd 一2的比值，促进肿瘤细胞凋亡。与荷瘤对照组比较，DJF能显著提高荷瘤小鼠 脾脏指数、胸腺指数，增加小鼠脾淋巴细胞的增殖率，升高小鼠血浆IL．2含量。 6．体内安全性(LD50)实验结果表明，DJF组动物经14天观察未见任何中 毒症状、无死亡、不伴有降低体重或其他毒副作用。LDso5000mg／kg，属实际 无毒级。 研究结果表明，冬枣黄酮使用安全，具有一定的抑瘤作用，其作用机制可能 与冬枣黄酮具有诱导肿瘤细胞凋亡，提高机体的免疫功能，并具有一定的抗氧化 作用有关。对冬枣果实黄酮的制备及其抗氧化、抑瘤活性的研究填补了国内外学 术界的空白。 博士研究生胡迎芬(生理学) 指导教师 蒋正尧教授马爱国教授 关键词：冬枣；黄酮；提取；分离；抗氧化；抗肿瘤 The extractionand offlavonein ubeaswellas