冰城链霉菌C5酮基属间接合转移中断菌株的构建.pdfVIP

摘要 摘 要 米尔贝霉素具有广谱、高效的抗寄生虫活性口1，对宿主不良反应极低，是目前理想的驱 虫、杀虫药物。其C5-肟米尔贝霉素的活性更高，并且杀虫谱更广心’，效果更好。而5一酮基米 尔贝霉素由于其C5位酮基的化学性质比较活泼，很容易合成5．肟米尔贝素衍生物，是化学合 成5-肟米尔贝霉素衍生物的最佳前体，因此研究从米尔贝霉：素A3、A4N5．酮基米尔贝霉素A3、 A4的生物合成途径具有重要的意义∞，。 冰城链霉菌(Streptomyces 代谢产物具有较好的杀虫活性和高效防治能力。 接合转移作为基因转移工具已在多种链霉菌中成功应用，此方法既可以避开胞外核酸酶 使DNA免遭降解，在一定程度上还可以克服宿主对外源DNA的限制性修饰提高转化效率哺]。 酮基转化为羟基的还原酶基因，序列较保守旧1。本研究通过分子生物学的方法对binF基因进 行失活，从而获得产生C5-酮基米尔贝霉素的生产菌株。以冰城链霉菌226541为研究材料， 进行了大肠杆菌．冰城链霉菌属间接合转移系统的实验，尝试了冰城链霉菌中binF基因的中 断工作。 为了进一步研究binF基因在冰城链霉菌226541中的功能，本研究利用生物信息学分析 城链霉菌226541中，得到阳性接合子。对接合子进行抗生素稳定性和分子生物学筛选，最终 得到binF基因中断菌株。 霉菌226541孢子28C孵育30 mM min，大肠杆菌OD600值为0．2，混合涂布于含有30 Mgcl， 的MS培养基上，培养16 h覆盖抗生素。 关键词冰城链霉菌；接合转移；C-5酮基还原酶；NINe,断 Abstract 曼毫皇皇皇曼曼鼍皇曼舅皇皇蔓寰鼍鼍毫鼍皇皇寡皇曼曼皇曼鼍葛曼!量量皇曼曼粤曼寡鼍鼍皇曼曼寰曼皇寡皇鼍璺 C5l-ketoreductase Transfer Strainof ConjugalDisruption Streptomyces bingchenggensis Abstract Thecommercial A3andA4 product are16．membered milbemycins macrolideantibioticswith variouskindsofmites．5-oxime outstandingactivityagainst derivativesof A3and A4 milbemycins werefound tobe as effectiveanthelmintics．TheC5 highly duetoitsketo．chemical position of of properties 5-oxime activity,itseasysynthesis