几种虫生菌、食菌和植物病原真菌代谢组差异比较研究.pdfVIP

摘要 虫生菌主要指子囊菌亚门中虫草属真菌及其确知的无性型，由于其独特的杀 虫作用，以及其和昆虫的长期协同进化的作用，使得它们不仅是重要的生物防治 材料，同时还是宝贵的药用资源。为探讨虫生菌的代谢特点，本研究对虫生菌中 白僵菌属、绿僵菌属、棒束孢属的部分菌株与常见的几种食用菌和植物病原真菌 的固体发酵菌丝体的代谢物进行了系统性比较研究，具体内容包括：几种虫生菌、 食用茵、植物病原真菌菌丝体甲醇和乙酸乙酯提取物的薄层色谱比较；几种虫生 菌、食用菌、植物病原真菌菌丝体甲醇和乙酸乙酯提取物的清除自由基活性的定 性定量比较；几种虫生菌、食用菌、植物病原真菌菌丝体甲醇和乙酸乙酯混合提 取物中常见成分甘露醇、腺苷、虫草素、麦角甾醇的HPLC—MS分析比较；基于 }玎?LC．MS的代谢组学对几种虫生菌、食用菌、植物病原真菌菌丝体甲醇和乙酸 乙酯混合提取物的分析。 。 几种虫生菌、食用菌、植物病原真菌菌丝体甲醇提取物和乙酸乙酯提取物的 11LC结果显示，在254 m紫外下，绿色绿僵菌、金龟子绿僵菌、双型绿僵菌、 姬松茸、香菇、杏鲍菇、灰树花、平菇、金针菇、蝙蝠蛾拟青霉、蛹拟青霉、玫 烟色棒束孢、淡紫棒束孢、斜链棒束孢、环链棒束孢、蝉棒束孢、布氏白僵菌、 中国白僵菌、球孢白僵菌、粉红单端孢、青霉、辣椒灰霉都含有含量不同的腺昔； 黄绿绿僵菌、金龟子绿僵菌、灰树花、平菇、蛹拟青霉、古拟拟青霉、环链棒束 孢、球孢白僵菌、青霉都含有含量不同的虫草素。在Rf值为O．25处玫烟色棒束 孢、粉棒束孢、细脚棒束孢、斜链棒束孢、蝉棒束孢、布氏白僵菌、苏格兰白僵 菌、多形白僵菌、中国白僵菌、假球孢白僵菌、球孢白僵菌、粉红单端孢、青霉 都有相似的条带。而15％硫酸试剂显色结果表明，供试的32个菌株在Rf为0．18、 色的深浅不同，这表明虫生菌、食用茵和植物病原菌之间具有相同的物质，另外， 这些物质在不同菌株中含量也是不同的；供试的所有菌株的TLC图谱都存在明 显的种间差异；不同种属的菌株没有相似的图谱。 几种虫生菌、食用菌、植物病原真菌菌丝体甲醇提取物和乙酸乙酯提取物的 自由基清除活性的定性、定量比较发现，供试的32个菌株的菌丝体甲醇提取物 和乙酸乙酯提取物都有一定的自由基清除活性，但是相比之下，甲醇提取物普遍 具有自由基清除活性，且自由基清除活性的成分比较多。不同种属的样品自由基 清除的活性成分以Rf值0．2以下的极性较大的化合物和IU值0．84以及麦角甾 醇为主，而I江值O．84处的组分在虫生菌、食用菌、植物病原真菌中都存在。另 外，清除DPPH自由基活性的定量比较结果表明，虫生菌中的自由基清除率明显 高于食用菌和植物病原真菌。 采用Ⅷ?LC司订S以及结合TLC方法对几种虫生菌、食用菌、植物病原真菌 菌丝体的甲醇和乙酸乙酯混合提取物中甘露醇、腺苷、虫草素、麦角甾醇进行了 分析，结果表明所有供试菌株都含有甘露醇(除灰树花)和麦角甾醇；苏格兰白 僵菌、假球孢白僵菌、戴氏绿僵菌、粉棒束孢、细脚棒束孢的总离子流图谱中没 有与腺苷的峰对应的物质；多形白僵菌、布氏白僵菌、苏格兰白僵菌、中国白僵 茵、假球孢白僵菌、柱孢绿僵菌、戴氏绿僵菌、双型孢绿僵菌、斜链棒束孢、粉 棒束孢、玫烟色棒束孢、细脚棒束孢、蝙蝠蛾拟青霉、麦轴梗孢、辣椒灰霉的总 离子流图谱中没有与虫草素的峰对应的物质。本试验中发现常见的几种食用菌及 植物病原真菌里的辣椒灰霉、青霉、粉红单端孢、麦轴梗孢也含有腺苷成分；灰 树花、杏鲍菇、金针菇、平菇、姬松茸、青霉、粉红单端孢以及部分虫生菌含有 虫草素，但是在食用菌中及青霉、粉红单端孢中尚属于首次发现。 利用基于}玎?LC．MS鞠代谢组学方法对白僵菌、绿僵菌与棒束孢菌丝体的甲 醇和乙酸乙酯混合提取物研究发现，白僵菌、绿僵菌与棒束孢在DendrogmIIl中 绿僵菌与棒束孢先聚为一类，最后与白僵菌聚在一起，说明绿僵菌与棒束孢在代 谢物组成上比较接近。对虫生菌(白僵菌、绿僵菌、棒束孢)、食用菌与植物病 原真菌菌丝体的甲醇和乙酸乙酯混合提取物进行基于HPLC—MS代谢组学分析后， 我们发现白僵菌、绿僵菌和棒束孢中部分特有的化合物，这些化合物可能是虫菌 长期协同进化所产生的特有产物，这对虫菌作用机理研究和推断虫生菌浸染昆虫 有重要的研究参考价值。 关键词：虫生菌、食用菌、植物病原真菌、成分比较、自由基清除剂、液质联用、 代谢组学、化学分类