发根农杆菌转化地黄突变体鉴定与基因克隆.pdfVIP

IIllJlI IIII I rl I llll Ylll ＼1734843 摘 要 本研究旨在对怀地黄转基因和组织培养突变品系(简称突变品系)H1|I『进行扩繁、移 栽、田间种植和鉴定，对怀地黄基因克隆进行探索，为怀地黄新品种培育和基因研究提 供依据。 l、建立了怀地黄转基因和组织培养突变品系扩繁和移栽技术体系，实现了其田间 的成功种植，从形态、叶绿素含量、还原糖和总糖含量、单株块根鲜重和数目、叶脱分 化和再分化能力和DNA分子水平对其进行了鉴定。突变品系叶多上翘，对照85—5叶外 翻，叶片长于对照，多宽于对照；植株等于或高于对照，其中，Hw_7和Hw一8两个品系 最高，达35cm；7个突变品系的叶绿素含量高于对照，5个突变品系的叶绿素含量低于 对照；4个突变品系的还原糖含量高于或等于对照，1个突变品系的还原糖含量低于对 照，而5个突变品系的总糖含量都高于对照；5个突变品系的单株块根鲜重在 5个突变品系的单株块根数目均多于对照：在一定培养基上，突变品系Hw一12的愈伤组 织诱导率达100％，高于或等于对照的。其愈伤组织分化芽的能力也居第二位；一个SRAP 的DNA片段。 2、克隆了一个新的怀地黄基因片段及其中的一个开放阅读框。根据已知裂叶牵牛 的PNZIP启动子碱基序列设计一对引物，用PCR方法从怀地黄基因组中扩增出5个DNA 在NCBI中BLAST一些基因序列比对分析，发现其是一个类似于转座子的基因序列，而 且其中含有一个可以编码150个氨基酸的450bp完整的开放阅读框，克隆得到此开放阅 读框。 关键词：怀地黄，转基因，组织培养，开放阅读框，基因克隆 ABSTRACT The ofthis areto andcharacterizethevariantsof objectivesstudy propagate，transplant，plant et variantsforshort Rehmannia Sechih)Hsiao(calledbelow)HW glutinosa，huenchingensis(Chart transformationand tissue tocloneits rhizogenes-mediatedplant culture，and developedbyAgrobacterium thefoundationforits and research· new inordertolay biotechnologicalbreedinggene genefragment theircultivation their and accomplished l、Established transplantations)rstem，successfully propagation andtotal themmeansoftheir content，reducingsugar andcharacterized