农杆菌介导的PCS基因转化东农303马铃薯的研究.pdfVIP

摘要 摘要 干旱、盐碱、高温、低温等环境条件是影响植物生长发育的重要因素，这些非生物 因素通过渗透胁迫(osmoticstress)影响植物细胞膨压从而导致植物的不良生长。在渗 透胁迫下，植物将产生一些渗透调节物质抵抗该胁迫，包括脯氨酸和甜菜碱。脯氨酸主 适应能力，本论文实施了来自拟南芥的P5C$基因转化我国马铃薯栽培品种东农303的 研究。 首先通过不同植物生长调节剂组合的试验，优化了东农303马铃薯品种的高效再分 化体系：其次采用农杆菌介导法将P5CS基因转化到马铃薯基因组中，并通过PCR、 PCR片段BLAST、Southernblot检测，验证了目的基因已转入到马铃薯基因组中。另 外，探讨了转基因植株在干旱和盐胁迫条件下的生长势和生理生化变化。 l、分别利用马铃薯脱毒试管苗和薯块为试验材料，通过吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁 酸(IBA)、玉米素(ZT)、潮霉素(Hy)的不同组合优化了遗传转化体系。结果表明， 最适再分化培养基为MS+ZT 3．Smg／L+IAA1．0mg／L，再分化条件中最适潮霉素筛选压力 为6mg／L：最适生根培养基为1／2MS培养基，生根潮霉素筛选压力为10mg／L。 2、对潮霉素抗性株系进行了分子生物学检测。利用特异性引物进行了PSCS基因 的特异性PCR扩增，获得了一条701bp的所需目的条带；将所获得的目的条带进行连 别用限制性内切酶EcoR 有一个拷贝，最终获得了一个转基因株系。 长势和生理生化变化。结果表明，转基因株系在叶片伸展度、根系的发达程度以及在结 薯量上均优于非转基因株系。生理生化方面，转基因植株在盐胁迫时产生脯氨酸的含量 比未处理时增加了25倍，是未转基因植株的1．7倍，MDA含量的增加仅为未转基因植 度下，转基因植株脯氨酸含量分别是未转基因植株的1．2倍、1．4倍和2．1倍，转基因植 株丙二醛含量的增加均是未转基因植株的0．6倍，转基因植株SOD活性分别为未转基因 植株的2．5倍、2．8倍和5．6倍。以上试验结果表明转PSCS基因马铃薯的抗旱和耐盐性 均得到了提高。 关键词马铃薯；抗逆性；渗透胁迫：彤硒基因 Abstract Abstract are andotherenvironmentconditionsthe factorsof Drought，salinity,heat，cold important the and stressfactorswillaffect non-biological affectinggrowthdevelopment．These plant osmotic osmotic cell andcausethe growthby stress．Under plant turgorpressure plantpoor will osmotic and substances，includebetaine，to stress，theplant produce adjusting proline derivedfrom and 1· resistosmoticstress．