农杆菌介导的香遗传转化体系构建.pdfVIP

农杆菌介导的香菇遗传转化体系构建 摘 要 edodes)是广泛种植的食用菌之一，随着其基因组测序的完成， 香菇(Lentinula 功能基因组学研究将逐渐展开。遗传转化体系是基因功能研究的基础，其中农杆菌 介导的转化方法有着插入拷贝数少、稳定高效等优点。本研究采用农杆菌介导转化 法构建了一套适用于香菇的遗传转化体系。 和L205菌丝体分别共培养3 d。经ddH20清洗香菇菌丝后，在含有潮霉素和抗生素 的平皿上筛选转化子，PCR检测排除假阳性干扰。转化子在麦芽浸膏培养基(MYG) 上继代培养5轮后，仍能在含潮霉素的平皿上稳定生长。 不同启动子对不同受体菌株的潮霉素筛选效率统计显示，当载体 其中启动子为gpd时的潮霉素筛选效率是启动子为CaMV35S时的两倍，由此说明， 组成型内源启动子对香菇表达外源基因有很强的启动作用。受体菌株W1的潮霉素 筛选效率要略高于菌株L205，这可能与受体菌株的遗传背景有关。 本试验还对共培养的条件进行了优化，从农杆菌侵染时间、共培养温度、共培 养时间，以及在共培养过程中是否需要添加乙酰丁香酮等4个方面展开。结果表明， min、20min、30 农杆菌侵染10 min对潮霉素筛选效率的影响并不明显，共培养最 适温度为25C，共培养3d和4d的潮霉素筛选效率差别不大，而共培养2d则不能 很好的完成转化；共培养期间添加乙酰丁香酮，对转化子的生长十分必要。 本试验构建的香菇遗传转化体系，为今后香菇基因重组、基因沉默、基因超量 表达、插入突变等基因功能的研究奠定了基础，也为香菇生长发育机制研究提供了 重要的技术支撑。 关键词：香菇，遗传转化，3’．磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子，农杆菌，潮霉素筛选 效率 本研究获得国家自然科学基金项目资助 ABSTRACT Lentinulaedodesisakind of cultivatededible widely its fungi．Withgenome has sequencingcompleted，functionalresearchis genomics gradually a developed．As functionresearch genetic transformationshasbeen foundation，genetic usedin widely edible fungus whichthe researches，in transformation Agrobacterium—mediatedmetllod hasthe characteristicsoffew and effective．An copies，stable transformation genetic ofL．edodesWas in system constructedthis