乳酸菌素Lacicin 518的分离纯化及其理化性质研究.pdfVIP

1黎 燃Y1粼§9燃6删63 摘要 乳酸菌细菌素在食品防腐剂和医药领域有着广泛的应用前景，细菌素的分离纯化 是研究其分子结构及遗传学特性的重要基础。论文研究了乳酸乳球菌乳酸亚种 lactis 518所产的乳酸菌素Lacticin518的分离纯化工 (Lactococcus subsp．Lactis)Lactc 艺和理化特性。 摸索了乳酸菌素Lacticin518的纯化方法，采用饱和度为40％硫酸铵沉淀处理发 G．50凝胶过滤层析，流速为1．2mL／min。活性峰再进 酵上清液。之后进行Sephadex mL， 行疏水作用层析，使用苯基预装柱HiPrepⅢ16／10Phenyl(10w,sub)，柱体积为20 mmol／L 流速7．0 6．0 mol／L mL／min。结合缓冲液A为50 PBS缓冲液，含2 NaCI； pH mmol／L6．0PBS缓冲液。以60mL缓冲液A冲洗，；60 洗脱缓冲液B为50 pH mL缓 mL 缓冲液B洗脱。活性峰用制备型反相高效液相色谱进行制备，梯度洗脱条件为O．5 min．100％流动相A洗脱；5．27min：流动相B从0到100％：27．35min：100％的流 动相B洗脱：流速：3．0mL／min。流动相A为双蒸水，流动相为乙腈，均含有O．1％TFA (v／v)。采用上述流程，得到了单一活性峰，比活力提高了236．718倍，得率为1．021％。 测定了乳酸菌素Lacticin Lacticin kDa 518的凝胶过滤层析活性峰，结果显示其表观分子量处于4．1kDa至6．5 之间。 518的抑菌谱，结果表明乳酸菌素Laetiein 研究了乳酸菌素Lactiein 518对乳杆菌 Lactb 0801、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖乳杆菌、瑞士乳杆菌、短乳杆菌、食果 糖乳杆菌、粪肠球菌、嗜热链球菌、四联球菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金 黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌有抑制作用；对革兰氏阳性菌中的乳酸乳球菌乳脂亚 种、干酪乳杆菌无抑制作用；对鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、普通变形杆 菌等革兰氏阴性菌无抑制作用。 研究了乳酸菌素Lacticin 3．8范围内乳酸菌 518的pH活性范围，结果表明在pH 素Lacticin518都有抑菌能力。 研究了乳酸菌素Lacticin 518在不同pH值下对热的稳定性，结果表明乳酸菌素 51 Lacticin 8在酸性条件下对热稳定；在碱性条件下对热不稳定，活性会随着温度的 8时100℃处理后活性完全消失。 升高而逐渐下降，在pH 研究了乳酸菌素Lacticin518对酶的敏感性，结果表明乳酸菌素Lacticin518对糜 蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶E、蛋白酶K敏感；