农杆菌诱导北柴毛状根体系建立及UGT基因功能初步研究.pdfVIP

Code：1 University0225 Code：S14536 Register Dissertationforthe ofMaster Degree Cultureof Rootsof chinense Hairy Bupleurum Induced andBio．． byAgrobacterium rhizogenes function ofUGT Analysis Candidate： Sun Jing Supervisor： YangHongyi Associate Supervisor： Academic for： Master Degree Applied Speciality： Microbiology Dateof0ralExam ination：June，2014 University： Northeast ForestryUniversity 万方数据 摘要 摘要 chinense DC．)是中药柴胡的重要基源植物，柴胡皂营是其主要 北柴胡(Bupleurum 修饰酶，其中后修饰作用是形成柴胡皂苷种类多样性的主要因素。本研究对可能参与皂 苷生物合成的BcUGTIO基因进行功能验证。一方面，以发根农杆菌为诱导菌株，建立 北柴胡毛状根诱导体系，进行发根农杆菌介导的北柴胡BcUGTIO基因的遗传转化初步 研究。另一方面，构建BcUGTIO基因原核表达载体，诱导其表达，利用重组酶蛋白进 行体外酶活分析，探究BcUGTIO基因的功能，为最终阐明柴胡皂苷生物合成途径奠定 基础。具体研究结果如下： l 设计多种诱导条件，包括不同菌种种类、外植体类型、侵染方式和侵染时间 等，探索建立稳定的北柴胡毛状根诱导体系。结果在采用发根农杆菌A4侵染北柴胡无 菌苗叶基部，菌液浸染20 min，置于固体培养基(Bs+乙酰丁香酮200I|tmol／L+蔗糖20 6 d后，转入抑菌 g／L或MS+NAAmg／L+乙酰丁香酮200¨mol／L+蔗糖20g／L)共培养3 培养，10d左右发出毛状根。由此建立了北柴胡毛状根诱导体系。 2 三个月收获称重，测定其产量变化，HPLC方法检测毛状根柴胡皂苷含量。结果在添加 0．5 IBA的B5培养基中，毛状根产量(干重)和柴胡皂昔产量最高，分别为2．4 mg／L g