乳杆菌代谢产物NA组分对HT-29细胞和小鼠肠道Toll样受体通路的影响.pdfVIP

样受体通路的影响 硕士研究生： 桑丽敏 辛旨导教师： 唐 立 教授 指导小组： 文姝副教授 专业名称： 微生物学 摘 要 目的： 1．探索乳杆菌代谢产物RNA组分对TLRs通路的影响。 2．研究乳杆菌代谢产物RNA组分对肠道菌群失衡模型小鼠肠道菌群 恢复的影响。 方法： (1)调整HT029细胞浓度，并分为三组，阴性对照组、实验组、阳 养48h。 HT．29细胞培养液中IL．6的变化。 2．RNA组分对小鼠肠粘膜上皮细胞Toll样受体通路的影响 (1)采用抗生素头孢曲松钠灌胃的方式建立小鼠肠道菌群失衡模型 后，以RNA组分5mg／kg／天、7．5mg／kg／天、10mg／kg／天的剂量，连续3 天灌胃调节，并从灌服之日起每7天检测一次各免疫指标。 免疫组织化学方法方法检测TLR9和NF．tcBp65的变化。 的变化： 3．菌群分析法检测小鼠盲肠内容物菌群变化。 结果： (1)与对照组相比，RNA组分组TLR．9表达量略高于阴性对照组， 低于阳性对照组。NF．KBp65表达量亦为实验组略高于阴性对照组，低于 阳性对照组。 量高于阴性对照组(P0．05)，低于阳性对照组(P0．05)。 2．RNA组分对肠粘膜上皮细胞Toll样受体通路的影响 模型小鼠TLR9表达量大幅升高。经RNA组分处理后，TLR9表达量呈 明显回降趋势。随RNA组分作用浓度增加，TLR9表达量回降明显，且 作用时间越长，回降的效果越好。本实验中RNA组分(1 0mg／kg／天)组 恢复2l天时效果最好。TLR9免疫组化结果与RT-PCR结果一致， lOmg／kg／天RNA使失衡小鼠TLR9蛋白表达量回降。 (2)与正常小鼠相比，失衡模型小鼠TLR4表达量略有升高，经 RNA组分处理后，TLR4表达量恢复。失衡模型小鼠TLR2表达量明显 升高，经RNA组分处理后，总体呈回降趋势，但表达量仍高于正常小鼠。 失衡模型小鼠NF．t：Bp65表达量大幅升高，待RNA组分调节2l天后， NF．KBp65表达量下降。 (4)与正常小鼠相比，失衡模型小鼠血中IL．6含量显著升高，经 RNA组分作用7天，1 4天，2l天，IL．6含量明显低于失衡模型(P0．05)， 呈逐渐恢复趋势。 (5)失衡模型小鼠与正常小鼠比较，盲肠指数明显增高，经RNA 组分调节后，盲肠指数呈降低趋势。随作用浓度和时间的增加，降低效 果明显。 (6)失衡小鼠经RNA组分调节后，肠道中乳杆菌最先恢复正常水 平(P0．05)，21天时除酵母与消化球外，各菌群均已得到恢复(PO．05)。 (7)自然恢复组白细胞的表达量总体呈持续升高趋势，RNA组分 干预能遏止白细胞表达量的过度升高。分叶核细胞百分比经RNA组分调 节后，处于持续回降趋势，总体低于自然恢复组，21天基本恢复到正常 水平。血小板数在实验组与自然恢复组变化趋势与幅度基本一致。 结论： 1．乳杆菌代谢产物RNA组分对TLR通路具有调节作用。 2．乳杆菌代谢产物RNA组分具有恢复失衡小鼠优势菌群作用。 3．乳杆菌代谢产物RNA组分对外周血常规指标及免疫分子IL．6具有 的调节作用。 2 关键词：CPG．ODN肠粘膜上皮(IECs)Toll样受体(TLRs)NF．rB IL．6 3 TheeffectsofRNA fromLactobacilIus components metabolitesonHT_29celllineandintestinal