“黄海一号”中对虾抗白斑病的SRAP分子标记.pdfVIP

摘 要 对虾白斑综合症（White Spot Syndrome, WSS）是由对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus, WSSV)引起的一种对虾传染性疾病，该病的典型症状是病虾 甲壳内侧出现0.5~2.0 mm 的白色斑点。该病不仅传染性强、病程短，而且致死 率高，目前尚无有效的措施。中国对虾(Fenneropenaeus Chinensis)是我国主要的 对虾养殖品种，同样受到 WSSV 的影响，感染该病毒后产量严重下降。 本研究以河北省环渤海区分布的主要的对虾品种—— 中国对虾为研究对象， 于2008 年和2009 年连续两年采取抽样和有针对性的进行WSS 的流行病学调查； 然后监测了中国对虾在发病高危时期的主要水质参数变化特点；最后应用 SRAP 技术进行了中国对虾抗 WSSV 的分子标记的筛选。对河北省环渤海区共 8 个中 国对虾养殖场进行的WSSV 的流行病学调查，掌握了该地区WSS 的发病情况和 流行规律。选取沧州鑫海养殖场的两个条件良好的池塘作为实验水质监测池塘， 2008 年 6 月至 8 月对其中国对虾养殖水体进行了溶解氧、氨氮值和亚硝酸盐氮 值的监测。结果发现：在 7 月末 8 月初时，当水温在 25 ℃左右、pH 值在 7.85~8.12、 溶解氧在 7.1~8.4mg/L、亚硝酸盐氮值在 0.29~0.32mg/L、氨氮值在 0.65~0.75 之 间时，WSSV 疫情极有可能发生。用以上参数为 WSSV 中国对虾水质预警值， 成功的预警了 2009 年秦皇岛昌黎江鹏养殖场的对虾白斑综合症的发生，降低了 养殖场的经济损失。改良了中国对虾病毒 DNA 的提取方法，从中国对虾肌肉组 织中就可以提取适合质量和浓度的病毒 DNA 供 PCR 监测之用，而且取样时间可 以延长到 3 天~5 天。通过 SRAP 分子标记技术，用筛选后的扩增多态性良好的 52 对引物对中国对虾 WSSV 感病组（人工投喂感染）和抗病组进行 SRAP-PCR， 然后聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶电泳和银染，共找到了 11 条特异性序列可能与中国 对虾 WSSV 抗性相关。进一步应用生物信息学方法，在 NCBI 公共数据库上比 对，找到编号为 40.3 、4.20 、25.14 的标记序列分别与表达大西洋鲑的重金属外 排蛋白、表达绵羊的免疫球蛋白、表达斑点叉尾鮰的醛脱氢酶的基因的部分序列 相似度为 93%、100%、87%。可以推断它们参与中国对虾表达相应的功能蛋白 来间接提高对 WSSV 的抗性。可以作为筛选中国对虾抗 WSSV 的分子标记进行 苗种选育。本研究结果为以后中国对虾 WSSV 的预防和优良苗种的选育提供了 III 理论依据。 关键词：中国对虾，对虾白斑综合症病毒，SRAP 分子标记，苗种选育 IV Abstract White Spot Syndrome (WSS), which is caused by White Spot Syndrome Virus (WSSV), is a shrimp infectious disease. Its typical symptom is 0.5~2.0 mm of white spots in the shells of sick shrimp. The disease is not only contagious, short course and has a mortality rate; there is no effective measure currently. Fenneropenaeus Chinensis is the main shrimp species in China; it is also impacted by WSSV of serious decline in production. In this study, we select mainly Fenneropenaeus Chinensis in the surrounding of The Bohai Sea as the research object, in the