PDGF介导RCK对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2的表达及活性的影响.pdfVIP

PDGF介导ROCK对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶．2 的表达及活性的影响 硕士研究生： 洪 艳 专旨导教师： 高 颖 教授 专业名称： 生物化学与分子生物学 ’ j 置E 摘 jC 目的：目前心血管疾病是威胁人类生命的主要疾病之一。其中血管 smoothmuscle 平滑肌细胞(vascular cell，VSMC)由中膜迁移到内膜下间 隙并异常增生是动脉粥样硬化、高血压、血管成形术后再狭窄、冠心病 growthfactor，PDGF)是一种重要的促细胞有丝分裂剂，同时具有趋化活 性和分裂活性，它可以诱导VSMC从中膜迁移到内膜。PDGF．BB是目前 已知最强的VSMC体外趋化剂。VSMC从中膜迁移到内膜的前提是需要 matrix，ECM)降解掉。已知基质金 将细胞周围的细胞外基质(extracellular 属蛋白酶(matrix 家族，由VSMC、巨噬细胞及其它一些细胞产生。它可以降解大部分ECM， 为VSMC的迁移扫清道路。其中尤其以MMP．2最为重要，它可以降解 酸／苏氨酸蛋白激酶家族成员之一，也是目前功能研究最为清楚的Rho下 I和ROCK 游靶效应分子。它有两种亚型，分别是ROCK II。大量研究 证明，Rho／ROCK信号通路参与了细胞多种生理功能的调节，例如，细 胞迁移、细胞增殖、细胞粘附、细胞骨架重组以及其他炎症反应，而这 些细胞功能又与许多心血管疾病的发生、发展有密切关系。ROCK的两 种亚型氨基酸序列具有65％的同源性，其中两者激酶区的同源性高达 92％。因此，一般研究者认为两者在细胞内的功能相同。但是近年来研 究发现ROCKI和ROCKII在某些细胞中具有不同的磷酸化底物，提示 两者的作用机制可能会有不同。目前，ROCK的两种亚型在血管平滑肌 细胞迁移中的作用机制是否相同尚不明确。本文旨在研究PDGF介导 ROCK亚型(ROCKI和ROCKII)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7rS)基 质金属蛋白酶2(MMP．21表达及活性的影响。 扰技术，通过脂质体转染ROCK亚型的siRNA，使ROCKI或ROCKII 基因表达下调，并检测基因下调后蛋白表达水平；(3)使用免疫印迹法 (western ROCK 诱导的A7r5细胞迁移的影响；(5)利用细胞免疫荧光方法观察细胞骨架 变化情况。 结果：(1)明胶酶谱显示PDGF呈浓度依赖性增加血管平滑肌细胞 ROCK I和ROCK ROCK ROCKI和ROCK I下调抑 II表达下调均抑制MMP．2的活性；(5)ROCK 制VSMC迁移，ROCK II下调抑制作用不明显：(6)PDGF诱导血管平滑 II 肌细胞伪足明显增加，转染ROCKI和ROCKsiRNA的细胞伪足明显 减少，PDGF诱导下转染ROCKIsiRNA的细胞伪足增加不明显，转染 ROCKIIsil斟A的细胞伪足增加明显。 I在血管平滑肌细胞的迁移中起主导作用，而 一结论：(1)ROCK ROCK I和ROCK II对迁移影响不明显。(2)ROCK II蛋白表达下调均抑制 迁移的下游分子。 I ROCKII 血管平滑肌细胞