发酵木糖产乙醇菌的分离鉴定及产乙醇代谢持性的研究.pdfVIP

发酵木糖产乙醇真菌的分离鉴定及产乙醇代谢特性的研究 摘要 木糖是纤维素质的主要组分，其在自然界中的储量仅次于葡萄糖，分 离筛选能发酵木糖产乙醇的微生物对纤维素质乙醇的生产具有重要意义。 本研究采用以木糖作为唯一碳源的富集和分离方法从采集的土样中分离纯 化到能利用木糖的酵母样真菌207株，通过发酵木糖产乙醇的性能和发酵葡 萄糖产乙醇的性能测定，从中筛选到两株乙醇生产性能良好的发酵木糖酵 母菌XY-19和GX．15。XY-19经形态鉴定及18S 数据库上的比对结果被鉴定为Candida tropicalis，并命名为Ctropicalis Xyol9，GX一15经形态鉴定及26S marxianusGX．15。 marxianus，并命名为K 对结果被鉴定为Kluyveromyces 动力学研究表明，C XY-19发酵葡萄糖的性能与我国乙醇工业生 tropicalis lh～、2．12 产所用的安琪酒精酵母相似，其um积、珞、巧、巧，s分别为O．1 g／1·h、 1．11 氧条件下才能利用木糖，其利用木糖的能力比利用葡萄糖的能力差，在有 氧条件下葡萄糖的消耗速度珞为3．02g／1·h，而木糖的消耗速度珞只有 0．739／1·h，木糖的利用受到葡萄糖的抑制，发酵木糖时积累大量的木糖醇。 XY-19的乙醇耐受性比酿酒酵母差，在超过7％(v／v)的乙醇中不能生长。 经过4轮genome 比野生菌株XY．19提高了71％。 Kmarxianus GX一15乙醇发酵的最适温度为40。C，最适发酵pH为4．0。 在超过9％(v／v)的乙醇中不能生长。发酵葡萄糖产乙醇的动力学研究表明， GX．1 h．1、1．78 5具有良好的乙醇发酵。lI．|i,q-台日匕E，其∥一、％、咋、耳，s分别为0．1l g／1·h、O．76g／l·h和0．439／g。采用两轮紫外线照射一亚硝基胍诱变交替处理的 marxianus 复合诱变方法对K GX一15进行诱变，结合TTC的筛选方法，获得 糖的消耗速率珞提高T38％，比生长速率∥咄提高了18．2％，乙醇生成速率咋 提高T26．3％，乙醇产量提高25．2％，乙醇耐受性从9％提高到11％。 采用以木糖作为唯一碳源的厌氧富集和厌氧分离方法从采集的土样中 分离纯化到一株能在厌氧条件下利用木糖生长的霉菌XE．1。经形态鉴定及 18S sp．XE．1。 该菌株能够发酵木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、纤维 二糖、麦芽糖、蔗糖和淀粉生成乙醇，最适发酵温度和最适生长温度都为 30。C，最适发酵pHi6．5，能耐受6％的乙醇。能够在100g／1木糖浓度下生长、 发酵生成乙醇，与其它已报道的木糖发酵微生物菌株相比其木糖耐受浓度比较高。 经木糖代谢关键酶的研究发现，虽然XE．1也是通过XR-XDH代谢途径代谢 lI 木糖，但是XE．1的木糖还原酶的辅酶偏好性和其它木糖利用真菌不同。该 该菌在发酵木糖过程中不积累任何木糖醇、在厌氧条件下也能发酵木糖产 生乙醇。在已研究的木糖利用真菌中，能够在厌氧条件下发酵木糖产生乙 醇、在发酵木糖过程中不积累任何木糖醇的真菌是非常少见的。 通过溶氧对XE．1发酵木糖产乙醇的影响的研究表明，虽然XE．1能够 在厌氧条件下发酵木糖生成乙醇，但溶氧对XE．1发酵木糖产乙醇的影响还 是比较大的，在好氧和半好氧条件下，XE．1分别在96h和84