对鳞翅目害虫具高毒力的Bt菌株筛选.pdfVIP

摘要 摘 要 害虫防治是农业生产中的一项重要的任务，苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringfensis) 作为一种与环境友好的微生物杀虫剂，具有巨大的应用前景，在绿色植保中扮演了重要的 角色。除用作杀虫剂之外，Bt杀虫基因还被应用于转基因抗虫作物的开发。目前，crylA 基因的抗虫棉花在中国已经得到广泛的种植，有效的解决了棉铃虫对棉花生产的危害。但 是随着转基因抗虫作物的大面积种植，害虫的抗药性上升风险不断增大，向害虫防治提出 了新的挑战。 本文以筛选可用于杀虫剂开发与应用的具有高活性并且与crylA类基因无交互抗性的 菌株为目的，依据与crylA类无交互抗性的cry基因序列，通过聚类分析已知与crylA类 基因无交互抗性的的基因设计了8对鉴定引物，通过PCR的方法鉴定了实验室保存的192 株对鳞翅目具有高毒力的菌株，鉴定出了15株对鳞翅目具有高毒力的的菌株。 对这15株菌株进行质粒图谱分析，这15株菌株可分成8种类型，对其基因型鉴定， 态包含：双锥体形、方形、球形；SDS．PAGE分析其中一株既表达130ku的蛋白又表达60 l(u左右的蛋白，一株同时表达130ku和70 ku左右的 ku左右的蛋白，其余菌株均表达130 蛋白并对胞晶混合物中的晶体蛋白含量进行定量分析。 选取了目前生产菌株KNll为对照，对这8株菌株进行了甜菜夜蛾、小菜蛾、敏感棉 铃虫、CrylAc抗性棉铃虫的的生物活性测定。这8株菌株对小菜蛾均表现出较高的杀虫活 1高近4倍；3株菌对甜菜夜 性，其中菌株PS4．E12对小菜蛾的杀虫活性要比对照菌株KNl 蛾幼虫具有高毒力，其中菌株PS3．C2对甜菜夜蛾LC50值为1．87gg·mL～；对敏感棉铃虫具 果需进一步验证。 通过GenBank成功设计了Bt菌株的几丁质酶基因的鉴定引物，并利用PCR的方法鉴 定了菌株中的几丁质酶基因，这8株菌株中均含有几丁质酶基因。 同时测定了各菌株的生长状态，各菌株在生长速率上没有表现出差异性。 本研究在菌株特性、生长曲线、活芽胞计数、杀虫活性等方向对菌株进行了评估，研 究结果对Bt新菌株的选育和开发具有重要的意义。 关键词苏云金芽胞杆菌；cry基因；交互抗性：杀虫活性 of Bacillusth Strains Screening of uringiensisStrong Virulence Pest against Lepidopterous Abs仃act Btasamicrobial to insecticide，harmless a an environment，showinggreat prospect，plays rolefor Importantthe controlisan greenplantprotection．Pest taskinthe important agricultural