特色药源植物盾薯蓣遗传转化的研究.pdfVIP

戤 摘要 盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensisC．H．Wright)是我国特有的多年生药用植物，其 根状茎中的薯蓣皂甙元是合成甾体激素类药物的重要材料。在薯蓣属中，野生盾叶薯 蓣的皂甙元含量最高，据报道最高达到16．15％。近年来，随着人们对薯蓣皂甙元的需 求量增多和过度开发利用，野生盾叶薯蓣资源紧缺。为解决这一现状，人们进行了多 种努力，但是人工栽培育种存在薯蓣皂甙元含量和产量降低，多倍体育种存在盾叶薯 蓣根状茎的产量及薯蓣皂甙元的含量不稳定等问题，而基因工程手段为盾叶薯蓣的品 种改良开辟了新的途径。 本文首先对盾叶薯蓣再生体系进行了研究，以改良MS为基本培养基，添加不同 浓度的激素(6-BA和NAA)组合，确定了适合无菌苗的腋芽萌发、愈伤组织诱导、 分化和生根培养基的最适激素浓度组合，愈伤组织分化率可达90％以上，并且90％以 上的再生苗能够跃出须根，炼苗移栽后成活率较高；研究了农卡I『：菌侵染浓度、时间， 共培养时间，筛选培养的潮霉素B浓度和时间，抗生素的添加浓度，利用含有rFCA— RRMl基因片段的根癌农杆菌EHAl05质粒，转化了盾叶薯蓣胚性愈伤组织；对盾叶薯 蓣胚性愈伤组织进行rFCA．RRM2基因片段的基凶枪法转化；将抗性愈伤组织经分化培 养后，转入生根培养基诱导生根，经炼苗，移栽于室外培养。将盾叶薯蓣转基因再生 植株的叶片基因组DNA进行PCR检测，初步证明外源基因已经整合到盾叶薯蓣的基 凶组中；测定了野生盾叶薯蓣根状茎及愈伤组织中薯蓣皂甙元含餐。本研究为通过转 基凶方法对盾叶薯蓣进行品种改良奠定了一定的基础。 关键词：盾叶薯蓣、遗传转化、农杆菌法、基因枪法 ABSTRACT isan isanative inChina，which Dioscorea C．H．Wright species zingiberensis initsrhizomeisthe resource plant．Thediosgenin importantperennial，medical allDioscorea hormonalmedicines．In materialforsteroid species，the important wildDioscorea isthe tobe concentof in highest，andreported diosgenin zingiberensis aresome onDioscorea breeding． 16．1 problems zingiberensis 5％．Nowadays，there forthe Dioscorea resourceswerereduced excessively First．wild zingiberensis and contentionof wasdecreasedinthe