脐带血干细胞及其脐带间充质干细胞对失代偿期肝炎后肝硬化患者肝脏功能恢复研究.pdfVIP

目 录 |JIIIII I IIIII III IlU IIl 目 录 中文摘要…………………………………………．．1 英文摘要…………………………………………．．5 英文缩写…………………………………………。。9 研究论文 脐带血干细胞及脐带间充质干细胞对失代偿期肝炎后肝硬 化患者肝脏功能恢复的研究 前言……………………………………………10日U 舌……………………………………………lU 材料与方法………………………………………．。lO 结果……………………………………………20 附图……………………………………………23 1 附表……………………………………………3 讨论……………………………………………35 结论……………………………………………47 参考文献…………………………………………．49 综述干细胞治疗肝硬化的临床研究进展………………．．55 致谢……………………………………………65 个人简历……………………………………………………………67 中文摘要 脐带血干细胞及脐带问充质千细胞对失代偿期肝炎后肝硬化 患者肝脏功能恢复的研究 摘 要 近年来，患者自体骨髓干细胞移植在肝硬化治疗中的良好效果已 经得到认可，但该治疗方法存在诸多限制，比如：采集过程痛苦，数 量不足，分化能力不足等。体内外实验提示脐血干细胞及脐带间充质干 细胞在自我更新，增殖分化和扩增潜能方面均优于骨髓干细胞。本研 究的目的是建立分离脐血干细胞及脐带间充质干细胞分离培养的方 法，并观察两者植入对失代偿期肝炎后肝硬化的临床效果，以寻求一 种安全、有效的治疗肝炎后肝硬化的方法。 第一步无菌条件下采用负收集法分离脐血干细胞，同时采用酶消 化法分离脐带间充质干细胞。观察两种干细胞的形态，并通过流式细 胞仪进行进一步鉴定。 第二步选择47例失代偿期肝炎后肝硬化患者，在抗病毒治疗的基 础上，其中脐血干细胞治疗组(27例)，将脐血干细胞通过肝固有动脉 介入和静脉输注途径植入。脐带间充质干细胞治疗组(20例)，采用 同样方法植入。 观察干细胞植入前和植入后半个月、1个月、3个月及6个月时患 者血清学指标改变，主要包括肝功能指标：血浆白蛋白水平(ALB)、 常规指标：血小板(PLT)、白细胞(WBC)及凝血功能指标：凝血酶原时 间(PT)，肿瘤标记物：甲胎蛋白(AFP)。并对患者治疗前及治疗后3个 月B超结果进行比较，同时观察患者临床症状、体征(乏力、纳差、肝 病面容、蜘蛛痣等、)改善情况和术后不良反应。 采集的脐血量约为1 分离获得干细胞平均数为2131×108。倒置显微镜下观察，细胞分布均 匀，大小均匀，呈圆形，透亮，折光性强，细胞活性95％。流式细胞 仪检测结果：CD34+细胞占0．23％，活率为72．71％。无细胞污染事件 发生。 中文摘要 通过酶消化法，从脐带组织中成功获得间充质干细胞，细胞分离 培养至贴壁生长至80．90％融合约需10．14天。后大约3．5天传代一次。 倒置显微镜下观察，原代细胞呈扁平条索状。P1、P2、P3、P4代细胞 形态观察：细胞形态较均一，折光度好。细胞膜表面有小的突起，胞 核位于胞体的中央，为圆形或椭圆形，胞质丰富，呈成纤维样细胞形 态，平行排列生长或涡旋状生长。 在脐血干细胞治疗组中我们发现，术前与术后3个月、6个月AST、 胞计数在第3个月后显著增加俾D．05)，第6个月出现下降。血小板 计数无明显变化，但逐渐改善。AFP在第3个月较治疗前有明显差异 (PO．05)，第6个月出现下降。细胞植入后3个月左右行腹部超声检 查，门静脉直径减小13例，增大12例，不变2例。脾脏厚度16例减 小，11例增大。在治疗过程中无脏器衰竭及急性或慢性GVHD的病 例。发热病例4例，皮疹3例。植入细胞半个月，患者的精神、饮食 改善明显。腹胀、乏力不适好转。植入后6个月者腹腔积液减少率为 轻率为51．