日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类动物后宿主及其虫体miRNA表达分析.pdf

韩宏晓：日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类动物后宿主及虫体miRNA表达分析 1 i RNA 日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类动物后宿主及虫体m 表达分析 中文摘要 血吸虫病是由血吸虫感染引起的危害严重的人畜共患寄生虫病，在我国流行的是日本 血吸虫病，目前仍是我国最重要的公共卫生问题之一。日本血吸虫可感染40多种哺乳动 物宿主，不同宿主对血吸虫感染的适宜性存在较大的差别。山羊、黄牛、绵羊、兔子和小 鼠等都是其适宜宿主，血吸虫的发育率可达50％～70％，而在大鼠、水牛等非适宜宿主体 内血吸虫的发育率仅为10％左右，东方田鼠是至今发现的唯一一种感染血吸虫后不致病的 哺乳动物，血吸虫感染东方田鼠后，虫体发育迟缓，大部分虫体在感染后15天死亡，不 能发育成熟。不同的宿主有着独特的机体内环境，会影响日本血吸虫的生长发育、雌雄合 抱和虫卵形成，最终影响虫体在宿主体内的存活状态及宿主的病理变化。 miRNA是一种内源性的非编码小RNA分子，研究发现其在多个生物学过程如生长发 育、凋亡、增殖、细胞分化、能量代谢、免疫调控及肿瘤发生等发挥重要的作用。本研究 芯片比较、分析小鼠、大鼠和东方田鼠三种不同适宜性宿主感染日本血吸虫前后miRNA 的表达谱变化。本研究可加深理解miRNA在血吸虫的生长发育、与宿主相互作用等生物 学过程中发挥的调节作用提供理论基础，也可为筛选血吸虫的早期诊断分子标记、疫苗候 选分子和新治疗药物靶标提供新的思路和新途径。 一、不同适宜性啮齿类宿主来源日本血吸虫童虫miRNA的初步鉴定及血吸虫 凋亡研究 用Solexa深度测序法对小鼠、大鼠和东方田鼠来源的日本血吸虫童虫进行测序，结果 585 088 一共得到35 878条高质量的reads，其中有效的reads共有28302条。进一步的生 对研究日本血吸虫在不同宿主体内的生长发育、凋亡、营养代谢及相互作用提供了有价值 信息，为后续深入研究miRNA分子在血吸虫基因表达调控中的可能作用机制提供了理论 依据。 本课题组前期研究表明凋亡是促使日本血吸虫在东方田鼠体内消亡的主要原因之一， 亡调控相关。本研究使用凋亡常用的检测方法TUNEL(terminal 扬州大学博士论文 transferase-mediateddUTPnick-end 童虫虫体细胞凋亡现象。应用Annexin V／PI)技 V-FITC／propidium 术定量分析14天和23天日本血吸虫虫体细胞的凋亡比例，采用商业化哺乳动物凋亡关键 分子CaspaSe 7的 3和Caspase7活性检测试剂盒检测日本血吸虫虫体Casp2Lse3和CaspaSe 活性，结果显示童虫期虫体的活性高于成虫，雄性成虫的活性高于雌性成虫，相应的结果 得到qPCR验证。研究发现，广谱的凋亡抑制剂c嬲pasepeptide 3／7活性有着很好的抑制作用。通过对不同期别日本血吸虫凋 对日本血吸虫虫体的CaSpaSe 亡相关基因的qPCR分析，进一步明确了日本血吸虫可能存在的凋亡通路。这些结果为深 入探析miRNA在血吸虫凋亡中的调节作用，日本血吸虫与宿主的相互作用以及开发抗日 本血吸虫新药物奠定了基础。 i 二、日本血吸虫感染不同适宜性啮齿类宿主后组织mRNA表达谱变化 脏、脾脏和肺脏上调差异表达的分别有8、8和28个，下调差异表达的分别有3、5和23 个。这些差异表达miRNA分子的功能主要集中于免疫应答、营养代谢、细胞分化、凋亡 miRNA在日本血吸虫早期感染中可能发挥了重要的生物学功能，并影响着日本血吸虫在不 同